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大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數│││:532 釋出時間│││:2020/5/21
提 供 商│││: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小│││:
圖片型別│││: 下載次數│││: 136
資料型別│││: DOC 瀏覽次數│││: 532
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詳細介紹│││: 檔案下載    

大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)酶聯免疫

      檢測試劑盒使用說明書         

使用前仔細閱讀本說明書╃☁✘╃✘。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理✘·,來檢測大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)✘·,只能用於研究用途✘·,不得用於醫學診斷╃☁✘╃✘。

    │││:用於大鼠血清☁✘✘·•、血漿及相關液體樣本中基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)測定╃☁✘╃✘。

工作原理

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)水平╃☁✘╃✘。向預先包被了大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)✘·,溫育;溫育後✘·,加入生物素標記的抗基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)抗體╃☁✘╃✘。再與鏈黴親和素-HRP結合✘·,形成免疫複合物✘·,再經過溫育和洗滌✘·,去除未結合的酶✘·,然後加入底物A☁✘✘·•、B✘·,產生藍色✘·,並在酸的作用下轉化成終的黃色╃☁✘╃✘。顏色的深淺與樣品中大鼠基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)的濃度呈正相關╃☁✘╃✘。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品960μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗MMP-2抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材│││:

  • 37恆溫箱
  • 標準規格酶標儀
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項│││:

  • 從2-8℃取出的試劑盒✘·,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘╃☁✘╃✘。酶標包被板開封后如未用完✘·,板條應裝入密封袋中儲存╃☁✘╃✘。
  • 各步加樣均應使用加樣器✘·,並經常校對其準確性✘·,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行✘·,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染✘·,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜╃☁✘╃✘。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好╃☁✘╃✘。不同批號的試劑不要混用╃☁✘╃✘。保質前使用╃☁✘╃✘。
  • 底物B對光敏感✘·,避免長時間暴露於光下╃☁✘╃✘。

 

洗板方法│││:

1.手工洗板方法│││:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙✘·,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內✘·,浸泡1-2分鐘╃☁✘╃✘。根據需要✘·,重複此過程數次╃☁✘╃✘。

2.自動洗板│││:如果有自動洗板機✘·,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求│││: 

1.不能檢測含NaN3的樣品✘·,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性╃☁✘╃✘。

2.標本採集後儘早進行提取✘·,提取按相關文獻進行✘·,提取後應儘快進行實驗╃☁✘╃✘。若不能馬上進行試驗✘·,可將標本放於-20℃儲存✘·,但避免反覆凍融╃☁✘╃✘。

 

操作程式│││:

  • 標準品的稀釋│││:(本試劑盒提供原倍標準品一支✘·,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋╃☁✘╃✘。)

480μg/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

240μg/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

120μg/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

60μg/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

30μg/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  • 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數╃☁✘╃✘。每個標準品和空白孔建議做復孔╃☁✘╃✘。每個樣品根據自己的數量來定✘·,能使用復孔的儘量做復孔╃☁✘╃✘。
  • 加樣│││:1)空白孔✘·,空白對照孔不加樣品✘·,生物素標記的抗MMP-2抗體✘·,鏈黴親和素-HRP✘·,只加顯色劑A&B和終止液✘·,其餘各步操作相同;2)標準品孔│││:加入標準品50ul✘·,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體✘·,故不加);3)待測樣品孔│││:加入樣本40ul✘·,然後各加入抗MMP-2抗體10ul☁✘✘·•、鏈黴親和素-HRP50ul✘·,蓋上封板膜✘·,輕輕震盪混勻✘·,37℃溫育60分鐘╃☁✘╃✘。
  • 配液│││:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用╃☁✘╃✘。
  • 洗滌│││:小心揭掉封板膜✘·,棄去液體✘·,甩幹✘·,每孔加滿洗滌液✘·,靜置30秒後棄去✘·,如此重複5次✘·,拍幹╃☁✘╃✘。
  • 顯色│││:每孔先加入顯色劑A50ul✘·,再加入顯色劑B50μl✘·,輕輕震盪混勻✘·,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止│││:每孔加終止液50μl✘·,終止反應(此時藍色立轉黃色)╃☁✘╃✘。
  • 測定│││:以空白空調零✘·,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)╃☁✘╃✘。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行╃☁✘╃✘。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程✘·,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度╃☁✘╃✘。也可以使用各種應用軟體來計算╃☁✘╃✘。

 

操作程式總結│││:

試劑盒效能│││:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上╃☁✘╃✘。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍│││:

檢測範圍│││:20μg/L -480μg/L

 

儲存條件及有效期│││:

儲存│││:2-8╃☁✘╃✘。

有效期│││:6個月(2-8℃)╃☁✘╃✘。

 
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