使用前仔細閱讀本說明書▩••◕▩。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理↟↟，來檢測大鼠核因子κB受體活化因子配基（RANKL）↟↟，只能用於研究用途↟↟，不得用於醫學診斷▩••◕▩。

用    途₪✘：用於大鼠血清▩╃、血漿及相關液體樣本中核因子κB受體活化因子配基（RANKL）測定▩••◕▩。

工作原理₪✘：

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠核因子κB受體活化因子配基（RANKL）水平▩••◕▩。向預先包被了大鼠核因子κB受體活化因子配基（RANKL）單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠核因子κB受體活化因子配基（RANKL）↟↟，溫育；溫育後↟↟，加入生物素標記的抗核因子κB受體活化因子配基（RANKL）抗體▩••◕▩。再與鏈黴親和素-HRP結合↟↟，形成免疫複合物↟↟，再經過溫育和洗滌↟↟，去除未結合的酶↟↟，然後加入底物A▩╃、B↟↟，產生藍色↟↟，並在酸的作用下轉化成終的黃色▩••◕▩。顏色的深淺與樣品中大鼠核因子κB受體活化因子配基（RANKL）的濃度呈正相關▩••◕▩。

試劑盒組成 ₪✘：

需要而未提供的試劑和器材:

• 37℃恆溫箱
• 標準規格酶標儀
• 精密移液器及一次性吸頭
• 蒸餾水
• 一次性試管
• 吸水紙

注意事項:

• 從2-8℃取出的試劑盒↟↟，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘▩••◕▩。酶標包被板開封后如未用完↟↟，板條應裝入密封袋中儲存▩••◕▩。
• 各步加樣均應使用加樣器↟↟，並經常校對其準確性↟↟，以避免試驗誤差
• 嚴格按照說明書的操作進行↟↟，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
• 為避免交叉汙染↟↟，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜▩••◕▩。
• 不用的其它試劑應包裝好或蓋好▩••◕▩。不同批號的試劑不要混用▩••◕▩。保質前使用▩••◕▩。
• 底物B對光敏感↟↟，避免長時間暴露於光下▩••◕▩。

洗板方法:

1.手工洗板方法₪✘：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙↟↟，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內↟↟，浸泡1-2分鐘▩••◕▩。根據需要↟↟，重複此過程數次▩••◕▩。

2.自動洗板₪✘：如果有自動洗板機↟↟，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求₪✘：

1．不能檢測含NaN3的樣品↟↟，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性▩••◕▩。

2．標本採集後儘早進行提取↟↟，提取按相關文獻進行↟↟，提取後應儘快進行實驗▩••◕▩。若不能馬上進行試驗↟↟，可將標本放於-20℃儲存↟↟，但應避免反覆凍融▩••◕▩。

操作程式₪✘：

• 標準品的稀釋₪✘：(本試劑盒提供原倍標準品一支↟↟，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋▩••◕▩。)

• 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數▩••◕▩。每個標準品和空白孔建議做復孔▩••◕▩。每個樣品根據自己的數量來定↟↟，能使用復孔的儘量做復孔▩••◕▩。
• 加樣₪✘：1）空白孔↟↟，空白對照孔不加樣品↟↟，生物素標記的抗RANKL抗體↟↟，鏈黴親和素-HRP↟↟，只加顯色劑A&B和終止液↟↟，其餘各步操作相同；2）標準品孔₪✘：加入標準品50ul↟↟，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體↟↟，故不加)；3）代測樣品孔₪✘：加入樣本40ul↟↟，然後各加入抗RANKL抗體10ul▩╃、鏈黴親和素-HRP50ul↟↟，蓋上封板膜↟↟，輕輕震盪混勻↟↟，37℃溫育60分鐘▩••◕▩。
• 配液₪✘：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用▩••◕▩。
• 洗滌₪✘：小心揭掉封板膜↟↟，棄去液體↟↟，甩幹↟↟，每孔加滿洗滌液↟↟，靜置30秒後棄去↟↟，如此重複5次↟↟，拍幹▩••◕▩。
• 顯色₪✘：每孔先加入顯色劑A50ul↟↟，再加入顯色劑B50μl↟↟，輕輕震盪混勻↟↟，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止₪✘：每孔加終止液50μl↟↟，終止反應（此時藍色立轉黃色）▩••◕▩。
• 測定₪✘：以空白空調零↟↟，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）▩••◕▩。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行▩••◕▩。
• 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程↟↟，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度▩••◕▩。也可以使用各種應用軟體來計算▩••◕▩。

操作程式總結₪✘：

試劑盒效能₪✘：

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上▩••◕▩。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

檢測範圍₪✘：

檢測範圍₪✘：20 pmol/L -500 pmol/L

儲存條件及有效期₪✘：

儲存₪✘：2-8℃▩••◕▩。

有效期₪✘：6個月(2-8℃)▩••◕▩。