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牛α1-微球蛋白(α1-MG)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數☁│:523 釋出時間☁│:2020/4/21
提 供 商☁│: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小☁│:
圖片型別☁│: 下載次數☁│: 128
資料型別☁│: DOC 瀏覽次數☁│: 523
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詳細介紹☁│: 檔案下載    

使用前仔細閱讀本說明書✘✘✘·。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理·✘,來檢測牛α1-微球蛋白(α1-MG)·✘,只能用於研究用途·✘,不得用於醫學診斷✘✘✘·。

    ☁│:用於牛血清₪╃、血漿及相關液體樣本中α1-微球蛋白(α1-MG)測定✘✘✘·。

工作原理☁│:

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中牛α1-微球蛋白(α1-MG)水平✘✘✘·。向預先包被了牛α1-微球蛋白(α1-MG)單克隆抗體的酶標孔中加入牛α1-微球蛋白(α1-MG)·✘,溫育;溫育後·✘,加入生物素標記的抗α1-微球蛋白(α1-MG)抗體✘✘✘·。再與鏈黴親和素-HRP結合·✘,形成免疫複合物·✘,再經過溫育和洗滌·✘,去除未結合的酶·✘,然後加入底物A₪╃、B·✘,產生藍色·✘,並在酸的作用下轉化成終的黃色✘✘✘·。顏色的深淺與樣品中牛α1-微球蛋白(α1-MG)的濃度呈正相關✘✘✘·。

試劑盒組成 ☁│:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品9600ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗α1-MG抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

需要而未提供的試劑和器材☁│:

  • 37恆溫箱
  • 標準規格酶標儀
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項☁│:

  • 從2-8℃取出的試劑盒·✘,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘✘✘✘·。酶標包被板開封后如未用完·✘,板條應裝入密封袋中儲存✘✘✘·。
  • 各步加樣均應使用加樣器·✘,並經常校對其準確性·✘,以避免試驗誤差✘✘✘·。
  • 嚴格按照說明書的操作進行·✘,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準✘✘✘·。
  • 免交叉汙染·✘,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜✘✘✘·。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好✘✘✘·。不同批號的試劑不要混用✘✘✘·。保質前使用✘✘✘·。
  • 底物B對光敏感·✘,避免長時間暴露於光下✘✘✘·。

 

洗板方法☁│:

1.手工洗板方法☁│:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙·✘,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內·✘,浸泡1-2分鐘✘✘✘·。根據需要·✘,重複此過程數次✘✘✘·。

2.自動洗板☁│:如果有自動洗板機·✘,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中✘✘✘·。

 

標本要求 ☁│:

1.不能檢測含NaN3的樣品·✘,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性✘✘✘·。

2.標本採集後儘早進行提取·✘,提取按相關文獻進行·✘,提取後應儘快進行實驗✘✘✘·。若不能馬上進行試驗·✘,可將標本放於-20℃儲存·✘,但避免反覆凍融✘✘✘·。

 

操作程式☁│:

  • 標準品的稀釋☁│:(本試劑盒提供原倍標準品一支·✘,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋✘✘✘·。)

4800ng/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

2400ng/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

1200ng/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

600ng/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

300ng/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數✘✘✘·。每個標準品和空白孔建議做復孔✘✘✘·。每個樣品根據自己的數量來定·✘,能使用復孔的儘量做復孔✘✘✘·。
  • 加樣☁│:1)空白孔·✘,空白對照孔不加樣品·✘,生物素標記的抗α1-MG抗體·✘,鏈黴親和素-HRP·✘,只加顯色劑A&B和終止液·✘,其餘各步操作相同;2)標準品孔☁│:加入標準品50ul·✘,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體·✘,故不加);3)代測樣品孔☁│:加入樣本40ul·✘,然後各加入抗α1-MG抗體10ul₪╃、鏈黴親和素-HRP50ul·✘,蓋上封板膜·✘,輕輕震盪混勻·✘,37℃溫育60分鐘✘✘✘·。
  • 配液☁│:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用✘✘✘·。
  • 洗滌☁│:小心揭掉封板膜·✘,棄去液體·✘,甩幹·✘,每孔加滿洗滌液·✘,靜置30秒後棄去·✘,如此重複5次·✘,拍幹✘✘✘·。
  • 顯色☁│:每孔先加入顯色劑A50ul·✘,再加入顯色劑B50μl·✘,輕輕震盪混勻·✘,37℃避光顯色15分鐘✘✘✘·。
  • 終止☁│:每孔加終止液50μl·✘,終止反應(此時藍色立轉黃色)✘✘✘·。
  • 測定☁│:以空白空調零·✘,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)✘✘✘·。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行✘✘✘·。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程·✘,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度✘✘✘·。也可以使用各種應用軟體來計算✘✘✘·。

 

操作程式總結☁│:

試劑盒效能☁│:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上✘✘✘·。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍☁│:

檢測範圍☁│:150ng/L - 4800ng/L

 

儲存條件及有效期☁│:

儲存☁│:2-8✘✘✘·。

有效期☁│:6個月(2-8℃)✘✘✘·。

 
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