使用前仔細閱讀本說明書✘✘✘·。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理·✘，來檢測牛α1-微球蛋白(α1-MG)·✘，只能用於研究用途·✘，不得用於醫學診斷✘✘✘·。

用    途☁│：用於牛血清₪╃、血漿及相關液體樣本中α1-微球蛋白(α1-MG)測定✘✘✘·。

工作原理☁│：

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中牛α1-微球蛋白(α1-MG)水平✘✘✘·。向預先包被了牛α1-微球蛋白(α1-MG)單克隆抗體的酶標孔中加入牛α1-微球蛋白(α1-MG)·✘，溫育；溫育後·✘，加入生物素標記的抗α1-微球蛋白(α1-MG)抗體✘✘✘·。再與鏈黴親和素-HRP結合·✘，形成免疫複合物·✘，再經過溫育和洗滌·✘，去除未結合的酶·✘，然後加入底物A₪╃、B·✘，產生藍色·✘，並在酸的作用下轉化成終的黃色✘✘✘·。顏色的深淺與樣品中牛α1-微球蛋白(α1-MG)的濃度呈正相關✘✘✘·。

試劑盒組成 ☁│：

需要而未提供的試劑和器材☁│：

• 37℃恆溫箱
• 標準規格酶標儀
• 精密移液器及一次性吸頭
• 蒸餾水
• 一次性試管
• 吸水紙

注意事項☁│：

• 從2-8℃取出的試劑盒·✘，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘✘✘✘·。酶標包被板開封后如未用完·✘，板條應裝入密封袋中儲存✘✘✘·。
• 各步加樣均應使用加樣器·✘，並經常校對其準確性·✘，以避免試驗誤差✘✘✘·。
• 嚴格按照說明書的操作進行·✘，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準✘✘✘·。
• 為避免交叉汙染·✘，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜✘✘✘·。
• 不用的其它試劑應包裝好或蓋好✘✘✘·。不同批號的試劑不要混用✘✘✘·。保質前使用✘✘✘·。
• 底物B對光敏感·✘，避免長時間暴露於光下✘✘✘·。

洗板方法☁│：

1.手工洗板方法☁│：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙·✘，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內·✘，浸泡1-2分鐘✘✘✘·。根據需要·✘，重複此過程數次✘✘✘·。

2.自動洗板☁│：如果有自動洗板機·✘，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中✘✘✘·。

標本要求 ☁│：

1．不能檢測含NaN3的樣品·✘，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性✘✘✘·。

2．標本採集後儘早進行提取·✘，提取按相關文獻進行·✘，提取後應儘快進行實驗✘✘✘·。若不能馬上進行試驗·✘，可將標本放於-20℃儲存·✘，但應避免反覆凍融✘✘✘·。

操作程式☁│：

• 標準品的稀釋☁│：(本試劑盒提供原倍標準品一支·✘，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋✘✘✘·。)

• 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數✘✘✘·。每個標準品和空白孔建議做復孔✘✘✘·。每個樣品根據自己的數量來定·✘，能使用復孔的儘量做復孔✘✘✘·。
• 加樣☁│：1）空白孔·✘，空白對照孔不加樣品·✘，生物素標記的抗α1-MG抗體·✘，鏈黴親和素-HRP·✘，只加顯色劑A&B和終止液·✘，其餘各步操作相同；2）標準品孔☁│：加入標準品50ul·✘，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體·✘，故不加)；3）代測樣品孔☁│：加入樣本40ul·✘，然後各加入抗α1-MG抗體10ul₪╃、鏈黴親和素-HRP50ul·✘，蓋上封板膜·✘，輕輕震盪混勻·✘，37℃溫育60分鐘✘✘✘·。
• 配液☁│：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用✘✘✘·。
• 洗滌☁│：小心揭掉封板膜·✘，棄去液體·✘，甩幹·✘，每孔加滿洗滌液·✘，靜置30秒後棄去·✘，如此重複5次·✘，拍幹✘✘✘·。
• 顯色☁│：每孔先加入顯色劑A50ul·✘，再加入顯色劑B50μl·✘，輕輕震盪混勻·✘，37℃避光顯色15分鐘✘✘✘·。
• 終止☁│：每孔加終止液50μl·✘，終止反應（此時藍色立轉黃色）✘✘✘·。
• 測定☁│：以空白空調零·✘，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）✘✘✘·。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行✘✘✘·。
• 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程·✘，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度✘✘✘·。也可以使用各種應用軟體來計算✘✘✘·。

操作程式總結☁│：

試劑盒效能☁│：

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上✘✘✘·。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

檢測範圍☁│：

檢測範圍☁│：150ng/L - 4800ng/L

儲存條件及有效期☁│：

儲存☁│：2-8℃✘✘✘·。

有效期☁│：6個月(2-8℃)✘✘✘·。