使用前仔細閱讀本說明書↟•。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理↟↟✘│·，來檢測大鼠抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）↟↟✘│·，只能用於研究用途↟↟✘│·，不得用於醫學診斷↟•。

用    途╃▩：用於大鼠血清╃•、血漿及相關液體樣本中抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）測定↟•。

工作原理╃▩：

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）水平↟•。向預先包被了抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）克隆抗體的酶標孔中加入抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）↟↟✘│·，溫育；溫育後↟↟✘│·，加入生物素標記的抗APSA抗體↟•。再與鏈黴親和素-HRP結合↟↟✘│·，形成免疫複合物↟↟✘│·，再經過溫育和洗滌↟↟✘│·，去除未結合的酶↟↟✘│·，然後加入底物A╃•、B↟↟✘│·，產生藍色↟↟✘│·，並在酸的作用下轉化成終的黃色↟•。顏色的深淺與樣品中抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）的濃度呈正相關↟•。

試劑盒組成 ╃▩：

需要而未提供的試劑和器材╃▩：

• 37℃恆溫箱
• 標準規格酶標儀
• 精密移液器及一次性吸頭
• 蒸餾水
• 一次性試管
• 吸水紙

注意事項╃▩：

• 從2-8℃取出的試劑盒↟↟✘│·，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘↟•。酶標包被板開封后如未用完↟↟✘│·，板條應裝入密封袋中儲存↟•。
• 各步加樣均應使用加樣器↟↟✘│·，並經常校對其準確性↟↟✘│·，以避免試驗誤差↟•。
• 嚴格按照說明書的操作進行↟↟✘│·，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準↟•。
• 為避免交叉汙染↟↟✘│·，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜↟•。
• 不用的其它試劑應包裝好或蓋好↟•。不同批號的試劑不要混用↟•。保質前使用↟•。
• 底物B對光敏感↟↟✘│·，避免長時間暴露於光下↟•。

洗板方法

1.手工洗板方法╃▩：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙↟↟✘│·，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內↟↟✘│·，浸泡1-2分鐘↟•。根據需要↟↟✘│·，重複此過程數次↟•。

2.自動洗板╃▩：如果有自動洗板機↟↟✘│·，應在熟練使用後再用到正式實驗過程↟•。

標本要求 ╃▩：

1．不能檢測含NaN3的樣品↟↟✘│·，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性↟•。

2．標本採集後儘早進行提取↟↟✘│·，提取按相關文獻進行↟↟✘│·，提取後應儘快進行實驗↟•。若不能馬上進行試驗↟↟✘│·，可將標本放於-20℃儲存↟↟✘│·，但應避免反覆凍融↟•。

操作程式╃▩：

• 標準品的稀釋╃▩：(本試劑盒提供原倍標準品一支↟↟✘│·，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟•。)

• 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數↟•。每個標準品和空白孔建議做復孔↟•。每個 樣品根據自己的數量來定↟↟✘│·，能使用復孔的儘量做復孔↟•。
• 加樣╃▩：1）空白孔↟↟✘│·，空白對照孔不加樣品↟↟✘│·，生物素標記的抗APSA抗體↟↟✘│·，鏈黴親和素-HRP↟↟✘│·，只加顯色劑A&B和終止液↟↟✘│·，其餘各步操作相同；2）標準品孔╃▩：加入標準品50ul↟↟✘│·，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體↟↟✘│·，故不加)；3）代測樣品孔╃▩：加入樣本40ul↟↟✘│·，然後各加入抗APSA抗體10ul╃•、鏈黴親和素-HRP50ul↟↟✘│·，蓋上封板膜↟↟✘│·，輕輕震盪混勻↟↟✘│·，37℃溫育60分鐘↟•。 
• 配液╃▩：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用↟•。
• 洗滌╃▩：小心揭掉封板膜↟↟✘│·，棄去液體↟↟✘│·，甩幹↟↟✘│·，每孔加滿洗滌液↟↟✘│·，靜置30秒後棄去↟↟✘│·，如此重複5次↟↟✘│·，拍幹↟•。
• 顯色╃▩：每孔先加入顯色劑A50ul↟↟✘│·，再加入顯色劑B50μl↟↟✘│·，輕輕震盪混勻↟↟✘│·，37℃避光顯色15分鐘↟•。
• 終止╃▩：每孔加終止液50μl↟↟✘│·，終止反應（此時藍色立轉黃色）↟•。
• 測定╃▩：以空白空調零↟↟✘│·，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）↟•。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行↟•。
• 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程↟↟✘│·，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度↟•。也可以使用各種應用軟體來計算↟•。

操作程式總結╃▩：

檢測範圍╃▩：1 U/mL -50U/mL

儲存╃▩：2-8℃↟•。

有效期╃▩：6個月(2-8℃)