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大鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數╃▩:572 釋出時間╃▩:2020/4/14
提 供 商╃▩: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小╃▩:
圖片型別╃▩: 下載次數╃▩: 180
資料型別╃▩: DOC 瀏覽次數╃▩: 572
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詳細介紹╃▩: 檔案下載    

使用前仔細閱讀本說明書↟•。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理↟↟✘│·,來檢測大鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)↟↟✘│·,只能用於研究用途↟↟✘│·,不得用於醫學診斷↟•。

    ╃▩:用於大鼠血清╃•、血漿及相關液體樣本中抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)測定↟•。

工作原理╃▩:

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)水平↟•。向預先包被了抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)克隆抗體的酶標孔中加入抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)↟↟✘│·,溫育;溫育後↟↟✘│·,加入生物素標記的抗APSA抗體↟•。再與鏈黴親和素-HRP結合↟↟✘│·,形成免疫複合物↟↟✘│·,再經過溫育和洗滌↟↟✘│·,去除未結合的酶↟↟✘│·,然後加入底物A╃•、B↟↟✘│·,產生藍色↟↟✘│·,並在酸的作用下轉化成終的黃色↟•。顏色的深淺與樣品中抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)的濃度呈正相關↟•。

 

試劑盒組成 ╃▩:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品╃▩:80 U/mL

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗APSA抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材╃▩:

  • 37恆溫箱
  • 標準規格酶標儀
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項╃▩:

  • 從2-8℃取出的試劑盒↟↟✘│·,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘↟•。酶標包被板開封后如未用完↟↟✘│·,板條應裝入密封袋中儲存↟•。
  • 各步加樣均應使用加樣器↟↟✘│·,並經常校對其準確性↟↟✘│·,以避免試驗誤差↟•。
  • 嚴格按照說明書的操作進行↟↟✘│·,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準↟•。
  • 免交叉汙染↟↟✘│·,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜↟•。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好↟•。不同批號的試劑不要混用↟•。保質前使用↟•。
  • 底物B對光敏感↟↟✘│·,避免長時間暴露於光下↟•。

 

洗板方法

1.手工洗板方法╃▩:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙↟↟✘│·,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內↟↟✘│·,浸泡1-2分鐘↟•。根據需要↟↟✘│·,重複此過程數次↟•。

2.自動洗板╃▩:如果有自動洗板機↟↟✘│·,應在熟練使用後再用到正式實驗過程↟•。

 

標本要求 ╃▩:

1.不能檢測含NaN3的樣品↟↟✘│·,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性↟•。

2.標本採集後儘早進行提取↟↟✘│·,提取按相關文獻進行↟↟✘│·,提取後應儘快進行實驗↟•。若不能馬上進行試驗↟↟✘│·,可將標本放於-20℃儲存↟↟✘│·,但避免反覆凍融↟•。

 

操作程式╃▩:

  • 標準品的稀釋╃▩:(本試劑盒提供原倍標準品一支↟↟✘│·,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟•。)

40 U/mL

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

20 U/mL

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

10 U/mL

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

5 U/mL

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

2.5 U/mL

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數↟•。每個標準品和空白孔建議做復孔↟•。每個 樣品根據自己的數量來定↟↟✘│·,能使用復孔的儘量做復孔↟•。
  • 加樣╃▩:1)空白孔↟↟✘│·,空白對照孔不加樣品↟↟✘│·,生物素標記的抗APSA抗體↟↟✘│·,鏈黴親和素-HRP↟↟✘│·,只加顯色劑A&B和終止液↟↟✘│·,其餘各步操作相同;2)標準品孔╃▩:加入標準品50ul↟↟✘│·,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體↟↟✘│·,故不加);3)代測樣品孔╃▩:加入樣本40ul↟↟✘│·,然後各加入抗APSA抗體10ul╃•、鏈黴親和素-HRP50ul↟↟✘│·,蓋上封板膜↟↟✘│·,輕輕震盪混勻↟↟✘│·,37℃溫育60分鐘↟•。 
  • 配液╃▩:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用↟•。
  • 洗滌╃▩:小心揭掉封板膜↟↟✘│·,棄去液體↟↟✘│·,甩幹↟↟✘│·,每孔加滿洗滌液↟↟✘│·,靜置30秒後棄去↟↟✘│·,如此重複5次↟↟✘│·,拍幹↟•。
  • 顯色╃▩:每孔先加入顯色劑A50ul↟↟✘│·,再加入顯色劑B50μl↟↟✘│·,輕輕震盪混勻↟↟✘│·,37℃避光顯色15分鐘↟•。
  • 終止╃▩:每孔加終止液50μl↟↟✘│·,終止反應(此時藍色立轉黃色)↟•。
  • 測定╃▩:以空白空調零↟↟✘│·,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)↟•。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行↟•。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程↟↟✘│·,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度↟•。也可以使用各種應用軟體來計算↟•。

 

操作程式總結╃▩:

檢測範圍╃▩:1 U/mL -50U/mL

儲存╃▩:2-8↟•。

有效期╃▩:6個月(2-8℃)

 
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