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大鼠免疫球蛋白G(IgG)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數↟↟│✘:535 釋出時間↟↟│✘:2020/4/10
提 供 商↟↟│✘: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小↟↟│✘:
圖片型別↟↟│✘: 下載次數↟↟│✘: 119
資料型別↟↟│✘: DOC 瀏覽次數↟↟│✘: 535
相關產品↟↟│✘:
詳細介紹↟↟│✘: 檔案下載    

使用前仔細閱讀本說明書◕│╃✘。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理╃·,來檢測大鼠免疫球蛋白G(IgG)╃·,只能用於研究用途╃·,不得用於醫學診斷◕│╃✘。

    ↟↟│✘:用於大鼠血清·│◕、血漿及相關液體樣本中免疫球蛋白G(IgG)測定◕│╃✘。

工作原理

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠免疫球蛋白G(IgG)水平◕│╃✘。向預先包被了免疫球蛋白G(IgG)克隆抗體的酶標孔中加入免疫球蛋白G(IgG)╃·,溫育;溫育後╃·,加入生物素標記的抗IGG抗體◕│╃✘。再與鏈黴親和素-HRP結合╃·,形成免疫複合物╃·,再經過溫育和洗滌╃·,去除未結合的酶╃·,然後加入底物A·│◕、B╃·,產生藍色╃·,並在酸的作用下轉化成終的黃色◕│╃✘。顏色的深淺與樣品中免疫球蛋白G(IgG)的濃度呈正相關◕│╃✘。

 

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品↟↟│✘:24μg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗IGG抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材

  • 37恆溫箱◕│╃✘。
  • 標準規格酶標儀◕│╃✘。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水╃·,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項

  • 從2-8℃取出的試劑盒╃·,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘◕│╃✘。酶標包被板開封后如未用完╃·,板條應裝入密封袋中儲存◕│╃✘。
  • 各步加樣均應使用加樣器╃·,並經常校對其準確性╃·,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行╃·,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染╃·,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜◕│╃✘。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好◕│╃✘。不同批號的試劑不要混用◕│╃✘。保質前使用◕│╃✘。
  • 底物B對光敏感╃·,避免長時間暴露於光下◕│╃✘。

 

洗板方法

手工洗板方法↟↟│✘:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙╃·,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內╃·,浸泡1-2分鐘◕│╃✘。根據需要╃·,重複此過程數次◕│╃✘。

 

自動洗板↟↟│✘:如果有自動洗板機╃·,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品╃·,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性◕│╃✘。

2.標本採集後儘早進行提取╃·,提取按相關文獻進行╃·,提取後應儘快進行實驗◕│╃✘。若不能馬上進行試驗╃·,可將標本放於-20℃儲存╃·,但避免反覆凍融◕│╃✘。

 

操作程式

  • 標準品的稀釋↟↟│✘:(本試劑盒提供原倍標準品一支╃·,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋◕│╃✘。)

12μg/ml

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

6μg/ml

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

3μg/ml

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

1.5μg/ml

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

0.75μg/ml

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數◕│╃✘。每個標準品和空白孔建議做復孔◕│╃✘。每個樣品根據自己的數量來定╃·,能使用復孔的儘量做復孔◕│╃✘。
  • 加樣↟↟│✘:1)空白孔╃·,空白對照孔不加樣品╃·,生物素標記的抗IGG抗體╃·,鏈黴親和素-HRP╃·,只加顯色劑A&B和終止液╃·,其餘各步操作相同;2)標準品孔↟↟│✘:加入標準品50ul╃·,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體╃·,故不加);3)代測樣品孔↟↟│✘:加入樣本40ul╃·,然後各加入抗IGG抗體10ul·│◕、鏈黴親和素-HRP50ul╃·,蓋上封板膜╃·,輕輕震盪混勻╃·,37℃溫育60分鐘◕│╃✘。
  • 配液↟↟│✘:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用◕│╃✘。
  • 洗滌↟↟│✘:小心揭掉封板膜╃·,棄去液體╃·,甩幹╃·,每孔加滿洗滌液╃·,靜置30秒後棄去╃·,如此重複5次╃·,拍幹◕│╃✘。
  • 顯色↟↟│✘:每孔先加入顯色劑A50ul╃·,再加入顯色劑B50μl╃·,輕輕震盪混勻╃·,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止↟↟│✘:每孔加終止液50μl╃·,終止反應(此時藍色立轉黃色)◕│╃✘。
  • 測定↟↟│✘:以空白空調零╃·,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)◕│╃✘。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行◕│╃✘。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程╃·,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度◕│╃✘。也可以使用各種應用軟體來計算◕│╃✘。

 

操作程式總結↟↟│✘:

檢測範圍↟↟│✘:0.4μg/ml -15μg/ml

儲存↟↟│✘:2-8◕│╃✘。

有效期↟↟│✘:6個月(2-8℃)◕│╃✘。

 
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