使用前仔細閱讀本說明書◕│╃✘。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理╃·，來檢測大鼠免疫球蛋白G(IgG)╃·，只能用於研究用途╃·，不得用於醫學診斷◕│╃✘。

用    途↟↟│✘：用於大鼠血清·│◕、血漿及相關液體樣本中免疫球蛋白G(IgG)測定◕│╃✘。

工作原理

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠免疫球蛋白G(IgG)水平◕│╃✘。向預先包被了免疫球蛋白G(IgG)克隆抗體的酶標孔中加入免疫球蛋白G(IgG)╃·，溫育；溫育後╃·，加入生物素標記的抗IGG抗體◕│╃✘。再與鏈黴親和素-HRP結合╃·，形成免疫複合物╃·，再經過溫育和洗滌╃·，去除未結合的酶╃·，然後加入底物A·│◕、B╃·，產生藍色╃·，並在酸的作用下轉化成終的黃色◕│╃✘。顏色的深淺與樣品中免疫球蛋白G(IgG)的濃度呈正相關◕│╃✘。

試劑盒組成 

需要而未提供的試劑和器材

• 37℃恆溫箱◕│╃✘。
• 標準規格酶標儀◕│╃✘。
• 精密移液器及一次性吸頭
• 蒸餾水╃·，
• 一次性試管
• 吸水紙

注意事項

• 從2-8℃取出的試劑盒╃·，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘◕│╃✘。酶標包被板開封后如未用完╃·，板條應裝入密封袋中儲存◕│╃✘。
• 各步加樣均應使用加樣器╃·，並經常校對其準確性╃·，以避免試驗誤差
• 嚴格按照說明書的操作進行╃·，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
• 為避免交叉汙染╃·，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜◕│╃✘。
• 不用的其它試劑應包裝好或蓋好◕│╃✘。不同批號的試劑不要混用◕│╃✘。保質前使用◕│╃✘。
• 底物B對光敏感╃·，避免長時間暴露於光下◕│╃✘。

洗板方法

手工洗板方法↟↟│✘：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙╃·，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內╃·，浸泡1-2分鐘◕│╃✘。根據需要╃·，重複此過程數次◕│╃✘。

自動洗板↟↟│✘：如果有自動洗板機╃·，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求 

1．不能檢測含NaN3的樣品╃·，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性◕│╃✘。

2．標本採集後儘早進行提取╃·，提取按相關文獻進行╃·，提取後應儘快進行實驗◕│╃✘。若不能馬上進行試驗╃·，可將標本放於-20℃儲存╃·，但應避免反覆凍融◕│╃✘。

操作程式

• 標準品的稀釋↟↟│✘：(本試劑盒提供原倍標準品一支╃·，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋◕│╃✘。)

• 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數◕│╃✘。每個標準品和空白孔建議做復孔◕│╃✘。每個樣品根據自己的數量來定╃·，能使用復孔的儘量做復孔◕│╃✘。
• 加樣↟↟│✘：1）空白孔╃·，空白對照孔不加樣品╃·，生物素標記的抗IGG抗體╃·，鏈黴親和素-HRP╃·，只加顯色劑A&B和終止液╃·，其餘各步操作相同；2）標準品孔↟↟│✘：加入標準品50ul╃·，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體╃·，故不加)；3）代測樣品孔↟↟│✘：加入樣本40ul╃·，然後各加入抗IGG抗體10ul·│◕、鏈黴親和素-HRP50ul╃·，蓋上封板膜╃·，輕輕震盪混勻╃·，37℃溫育60分鐘◕│╃✘。
• 配液↟↟│✘：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用◕│╃✘。
• 洗滌↟↟│✘：小心揭掉封板膜╃·，棄去液體╃·，甩幹╃·，每孔加滿洗滌液╃·，靜置30秒後棄去╃·，如此重複5次╃·，拍幹◕│╃✘。
• 顯色↟↟│✘：每孔先加入顯色劑A50ul╃·，再加入顯色劑B50μl╃·，輕輕震盪混勻╃·，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止↟↟│✘：每孔加終止液50μl╃·，終止反應（此時藍色立轉黃色）◕│╃✘。
• 測定↟↟│✘：以空白空調零╃·，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）◕│╃✘。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行◕│╃✘。
• 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程╃·，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度◕│╃✘。也可以使用各種應用軟體來計算◕│╃✘。

操作程式總結↟↟│✘：

檢測範圍↟↟│✘：0.4μg/ml -15μg/ml

儲存↟↟│✘：2-8℃◕│╃✘。

有效期↟↟│✘：6個月(2-8℃)◕│╃✘。