使用前仔細閱讀本說明書│☁。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理☁◕│，來檢測大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)☁◕│，只能用於研究用途☁◕│，不得用於醫學診斷│☁。

用    途•☁╃↟₪：用於大鼠血清·◕₪◕、血漿及相關液體樣本中葡萄糖調節蛋白78(GRP78)測定│☁。

工作原理

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)水平│☁。向預先包被了大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)☁◕│，溫育；溫育後☁◕│，加入生物素標記的抗GRP78抗體│☁。再與鏈黴親和素-HRP結合☁◕│，形成免疫複合物☁◕│，再經過溫育和洗滌☁◕│，去除未結合的酶☁◕│，然後加入底物A·◕₪◕、B☁◕│，產生藍色☁◕│，並在酸的作用下轉化成終的黃色│☁。顏色的深淺與樣品中大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)的濃度呈正相關│☁。

試劑盒組成 

需要而未提供的試劑和器材

• 37℃恆溫箱│☁。
• 標準規格酶標儀│☁。
• 精密移液器及一次性吸頭
• 蒸餾水☁◕│，
• 一次性試管
• 吸水紙

注意事項

• 從2-8℃取出的試劑盒☁◕│，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘│☁。酶標包被板開封后如未用完☁◕│，板條應裝入密封袋中儲存│☁。
• 各步加樣均應使用加樣器☁◕│，並經常校對其準確性☁◕│，以避免試驗誤差
• 嚴格按照說明書的操作進行☁◕│，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
• 為避免交叉汙染☁◕│，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜│☁。
• 不用的其它試劑應包裝好或蓋好│☁。不同批號的試劑不要混用│☁。保質前使用│☁。
• 底物B對光敏感☁◕│，避免長時間暴露於光下│☁。

洗板方法

手工洗板方法•☁╃↟₪：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙☁◕│，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內☁◕│，浸泡1-2分鐘│☁。根據需要☁◕│，重複此過程數次│☁。

自動洗板•☁╃↟₪：如果有自動洗板機☁◕│，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求 

1．不能檢測含NaN3的樣品☁◕│，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性│☁。

2．標本採集後儘早進行提取☁◕│，提取按相關文獻進行☁◕│，提取後應儘快進行實驗│☁。若不能馬上進行試驗☁◕│，可將標本放於-20℃儲存☁◕│，但應避免反覆凍融│☁。

操作程式

• 標準品的稀釋•☁╃↟₪：(本試劑盒提供原倍標準品一支☁◕│，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋│☁。)

• 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數│☁。每個標準品和空白孔建議做復孔│☁。每個樣品根據自己的數量來定☁◕│，能使用復孔的儘量做復孔│☁。
• 加樣•☁╃↟₪：1）空白孔☁◕│，空白對照孔不加樣品☁◕│，生物素標記的抗GRP78抗體☁◕│，鏈黴親和素-HRP☁◕│，只加顯色劑A&B和終止液☁◕│，其餘各步操作相同；2）標準品孔•☁╃↟₪：加入標準品50ul☁◕│，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體☁◕│，故不加)；3）代測樣品孔•☁╃↟₪：加入樣本40ul☁◕│，然後各加入抗GRP78抗體10ul·◕₪◕、鏈黴親和素-HRP50ul☁◕│，蓋上封板膜☁◕│，輕輕震盪混勻☁◕│，37℃溫育60分鐘│☁。
• 配液•☁╃↟₪：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用│☁。
• 洗滌•☁╃↟₪：小心揭掉封板膜☁◕│，棄去液體☁◕│，甩幹☁◕│，每孔加滿洗滌液☁◕│，靜置30秒後棄去☁◕│，如此重複5次☁◕│，拍幹│☁。
• 顯色•☁╃↟₪：每孔先加入顯色劑A50ul☁◕│，再加入顯色劑B50μl☁◕│，輕輕震盪混勻☁◕│，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止•☁╃↟₪：每孔加終止液50μl☁◕│，終止反應（此時藍色立轉黃色）│☁。
• 測定•☁╃↟₪：以空白空調零☁◕│，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）│☁。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行│☁。
• 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程☁◕│，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度│☁。也可以使用各種應用軟體來計算│☁。

操作程式總結•☁╃↟₪：

試劑盒效能•☁╃↟₪：

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上│☁。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

檢測範圍•☁╃↟₪：

檢測範圍•☁╃↟₪：3pg/mL→90pg/mL│☁。

儲存條件及有效期•☁╃↟₪：

儲存•☁╃↟₪：2-8℃│☁。

有效期•☁╃↟₪：6個月(2-8℃)│☁。