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大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數•☁╃↟₪:538 釋出時間•☁╃↟₪:2020/4/10
提 供 商•☁╃↟₪: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小•☁╃↟₪:
圖片型別•☁╃↟₪: 下載次數•☁╃↟₪: 119
資料型別•☁╃↟₪: DOC 瀏覽次數•☁╃↟₪: 538
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詳細介紹•☁╃↟₪: 檔案下載    

使用前仔細閱讀本說明書│☁。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理☁◕│,來檢測大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)☁◕│,只能用於研究用途☁◕│,不得用於醫學診斷│☁。

    •☁╃↟₪:用於大鼠血清·◕₪◕、血漿及相關液體樣本中葡萄糖調節蛋白78(GRP78)測定│☁。

工作原理

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)水平│☁。向預先包被大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)☁◕│,溫育;溫育後☁◕│,加入生物素標記的抗GRP78抗體│☁。再與鏈黴親和素-HRP結合☁◕│,形成免疫複合物☁◕│,再經過溫育和洗滌☁◕│,去除未結合的酶☁◕│,然後加入底物A·◕₪◕、B☁◕│,產生藍色☁◕│,並在酸的作用下轉化成終的黃色│☁。顏色的深淺與樣品中大鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)的濃度呈正相關│☁。

 

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品160 pg/mL

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗GRP78抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

需要而未提供的試劑和器材

  • 37恆溫箱│☁。
  • 標準規格酶標儀│☁。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水☁◕│,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項

  • 從2-8℃取出的試劑盒☁◕│,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘│☁。酶標包被板開封后如未用完☁◕│,板條應裝入密封袋中儲存│☁。
  • 各步加樣均應使用加樣器☁◕│,並經常校對其準確性☁◕│,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行☁◕│,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染☁◕│,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜│☁。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好│☁。不同批號的試劑不要混用│☁。保質前使用│☁。
  • 底物B對光敏感☁◕│,避免長時間暴露於光下│☁。

 

洗板方法

手工洗板方法•☁╃↟₪:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙☁◕│,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內☁◕│,浸泡1-2分鐘│☁。根據需要☁◕│,重複此過程數次│☁。

 

自動洗板•☁╃↟₪:如果有自動洗板機☁◕│,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品☁◕│,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性│☁。

2.標本採集後儘早進行提取☁◕│,提取按相關文獻進行☁◕│,提取後應儘快進行實驗│☁。若不能馬上進行試驗☁◕│,可將標本放於-20℃儲存☁◕│,但避免反覆凍融│☁。

操作程式

  • 標準品的稀釋•☁╃↟₪:(本試劑盒提供原倍標準品一支☁◕│,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋│☁。)

80pg/mL

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

40pg/mL

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

20pg/mL

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

10pg/mL

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

5pg/mL

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數│☁。每個標準品和空白孔建議做復孔│☁。每個樣品根據自己的數量來定☁◕│,能使用復孔的儘量做復孔│☁。
  • 加樣•☁╃↟₪:1)空白孔☁◕│,空白對照孔不加樣品☁◕│,生物素標記的抗GRP78抗體☁◕│,鏈黴親和素-HRP☁◕│,只加顯色劑A&B和終止液☁◕│,其餘各步操作相同;2)標準品孔•☁╃↟₪:加入標準品50ul☁◕│,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體☁◕│,故不加);3)代測樣品孔•☁╃↟₪:加入樣本40ul☁◕│,然後各加入抗GRP78抗體10ul·◕₪◕、鏈黴親和素-HRP50ul☁◕│,蓋上封板膜☁◕│,輕輕震盪混勻☁◕│,37℃溫育60分鐘│☁。
  • 配液•☁╃↟₪:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用│☁。
  • 洗滌•☁╃↟₪:小心揭掉封板膜☁◕│,棄去液體☁◕│,甩幹☁◕│,每孔加滿洗滌液☁◕│,靜置30秒後棄去☁◕│,如此重複5次☁◕│,拍幹│☁。
  • 顯色•☁╃↟₪:每孔先加入顯色劑A50ul☁◕│,再加入顯色劑B50μl☁◕│,輕輕震盪混勻☁◕│,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止•☁╃↟₪:每孔加終止液50μl☁◕│,終止反應(此時藍色立轉黃色)│☁。
  • 測定•☁╃↟₪:以空白空調零☁◕│,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)│☁。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行│☁。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程☁◕│,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度│☁。也可以使用各種應用軟體來計算│☁。

 

操作程式總結•☁╃↟₪:

 

試劑盒效能•☁╃↟₪:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上│☁。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍•☁╃↟₪:

檢測範圍•☁╃↟₪:3pg/mL90pg/mL│☁。

 

儲存條件及有效期•☁╃↟₪:

儲存•☁╃↟₪:2-8│☁。

有效期•☁╃↟₪:6個月(2-8℃)│☁。

 
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