大鼠血管內皮細胞蛋白C受體（EPCR）酶聯免疫 檢測試劑盒使用說明書 AE94378Ra 使用前仔細閱讀本說明書╃▩╃。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理│↟▩，來檢測大鼠血管內皮細胞蛋白C受體（EPCR）│↟▩，只能用於研究用途│↟▩，不得用於醫學診斷╃▩╃。 用 途☁·╃：用於大鼠血清✘│✘☁、血漿及相關液體樣本中血管內皮細胞蛋白C受體（EPCR）測定╃▩╃。 工作原理 本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠血管內皮細胞蛋白C受體（EPCR）水平╃▩╃。向預先包被了大鼠血管內皮細胞蛋白C受體（EPCR）單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠血管內皮細胞蛋白C受體（EPCR）│↟▩，溫育；溫育後│↟▩，加入生物素標記的抗血管內皮細胞蛋白C受體（EPCR）抗體╃▩╃。再與鏈黴親和素-HRP結合│↟▩，形成免疫複合物│↟▩，再經過溫育和洗滌│↟▩，去除未結合的酶│↟▩，然後加入底物A✘│✘☁、B│↟▩，產生藍色│↟▩，並在酸的作用下轉化成終的黃色╃▩╃。顏色的深淺與樣品中大鼠血管內皮細胞蛋白C受體（EPCR）的濃度呈正相關╃▩╃。 試劑盒組成 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 儲存 | 說明書 | 1份 | 1份 | | 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | | 密封袋 | 1個 | 1個 | | 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃儲存 | 標準品40μg/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 標準品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 鏈黴親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 生物素標記的抗EPCR抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃儲存 |
需要而未提供的試劑和器材 - 37℃恆溫箱╃▩╃。
- 標準規格酶標儀╃▩╃。
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水│↟▩，
- 一次性試管
- 吸水紙
注意事項 - 從2-8℃取出的試劑盒│↟▩，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘╃▩╃。酶標包被板開封后如未用完│↟▩，板條應裝入密封袋中儲存╃▩╃。
- 各步加樣均應使用加樣器│↟▩，並經常校對其準確性│↟▩，以避免試驗誤差
- 嚴格按照說明書的操作進行│↟▩，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
- 為避免交叉汙染│↟▩，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜╃▩╃。
- 不用的其它試劑應包裝好或蓋好╃▩╃。不同批號的試劑不要混用╃▩╃。保質前使用╃▩╃。
- 底物B對光敏感│↟▩，避免長時間暴露於光下╃▩╃。
洗板方法 手工洗板方法☁·╃：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙│↟▩，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內│↟▩，浸泡1-2分鐘╃▩╃。根據需要│↟▩，重複此過程數次╃▩╃。 自動洗板☁·╃：如果有自動洗板機│↟▩，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中 標本要求 1．不能檢測含NaN3的樣品│↟▩，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性╃▩╃。 2．標本採集後儘早進行提取│↟▩，提取按相關文獻進行│↟▩，提取後應儘快進行實驗╃▩╃。若不能馬上進行試驗│↟▩，可將標本放於-20℃儲存│↟▩，但應避免反覆凍融╃▩╃。 操作程式 - 標準品的稀釋☁·╃：(本試劑盒提供原倍標準品一支│↟▩，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋╃▩╃。)
20μg/L | 5號標準品 | 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液 | 10μg/L | 4號標準品 | 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 5μg/L | 3號標準品 | 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 2.5μg/L | 2號標準品 | 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 1.25μg/L | 1號標準品 | 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
- 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數╃▩╃。每個標準品和空白孔建議做復孔╃▩╃。每個樣品根據自己的數量來定│↟▩，能使用復孔的儘量做復孔╃▩╃。
- 加樣☁·╃：1）空白孔│↟▩，空白對照孔不加樣品│↟▩，生物素標記的抗EPCR抗體│↟▩，鏈黴親和素-HRP│↟▩，只加顯色劑A&B和終止液│↟▩，其餘各步操作相同；2）標準品孔☁·╃：加入標準品50ul│↟▩，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體│↟▩，故不加)；3）待測樣品孔☁·╃：加入樣本40ul│↟▩，然後各加入抗EPCR抗體10ul✘│✘☁、鏈黴親和素-HRP50ul│↟▩，蓋上封板膜│↟▩，輕輕震盪混勻│↟▩，37℃溫育60分鐘╃▩╃。
- 配液☁·╃：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用╃▩╃。
- 洗滌☁·╃：小心揭掉封板膜│↟▩，棄去液體│↟▩，甩幹│↟▩，每孔加滿洗滌液│↟▩，靜置30秒後棄去│↟▩，如此重複5次│↟▩，拍幹╃▩╃。
- 顯色☁·╃：每孔先加入顯色劑A50ul│↟▩，再加入顯色劑B50μl│↟▩，輕輕震盪混勻│↟▩，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止☁·╃：每孔加終止液50μl│↟▩，終止反應（此時藍色立轉黃色）╃▩╃。
- 測定☁·╃：以空白空調零│↟▩，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）╃▩╃。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行╃▩╃。
- 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程│↟▩，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度╃▩╃。也可以使用各種應用軟體來計算╃▩╃。
操作程式總結☁·╃： 
試劑盒效能☁·╃： 1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上╃▩╃。 2.批內與批間應分別小於9%和15% 檢測範圍☁·╃： 檢測範圍☁·╃：0.6μg/L -22μg/L 儲存條件及有效期☁·╃： 儲存☁·╃：2-8℃╃▩╃。 有效期☁·╃：6個月(2-8℃)╃▩╃。 |
