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大鼠抑制Hh訊號通路蛋白SUFU(SUFU)酶聯免疫

點選次數·₪╃:528 釋出時間·₪╃:2019/8/29
提 供 商·₪╃: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小·₪╃:
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資料型別·₪╃: DOC 瀏覽次數·₪╃: 528
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大鼠抑制Hh訊號通路蛋白SUFU(SUFU)酶聯免疫檢測

                試劑盒使用說明書                               AE91845Ra

使用前仔細閱讀本說明書·◕·◕✘。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理☁•╃,來檢測大鼠抑制Hh訊號通路蛋白SUFU(SUFU)☁•╃,只能用於研究用途☁•╃,不得用於醫學診斷·◕·◕✘。

    ·₪╃:用於大鼠血清✘│◕✘、血漿及相關液體樣本中抑制Hh訊號通路蛋白SUFU(SUFU)測定·◕·◕✘。

工作原理:

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠抑制Hh訊號通路蛋白SUFU(SUFU)水平·◕·◕✘。向預先包被大鼠抑制Hh訊號通路蛋白SUFU(SUFU)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠抑制Hh訊號通路蛋白SUFU(SUFU)☁•╃,溫育;溫育後☁•╃,加入生物素標記的抗SUFU抗體·◕·◕✘。再與鏈黴親和素-HRP結合☁•╃,形成免疫複合物☁•╃,再經過溫育和洗滌☁•╃,去除未結合的酶☁•╃,然後加入底物A✘│◕✘、B☁•╃,產生藍色☁•╃,並在酸的作用下轉化成終的黃色·◕·◕✘。顏色的深淺與樣品中大鼠抑制Hh訊號通路蛋白SUFU(SUFU)的濃度呈正相關·◕·◕✘。

 

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品8000pg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗SUFU抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

需要而未提供的試劑和器材

  • 37恆溫箱·◕·◕✘。
  • 標準規格酶標儀·◕·◕✘。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水☁•╃,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項

  • 從2-8℃取出的試劑盒☁•╃,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘·◕·◕✘。酶標包被板開封后如未用完☁•╃,板條應裝入密封袋中儲存·◕·◕✘。
  • 各步加樣均應使用加樣器☁•╃,並經常校對其準確性☁•╃,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行☁•╃,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染☁•╃,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜·◕·◕✘。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好·◕·◕✘。不同批號的試劑不要混用·◕·◕✘。保質前使用·◕·◕✘。
  • 底物B對光敏感☁•╃,避免長時間暴露於光下·◕·◕✘。

 

洗板方法

手工洗板方法·₪╃:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙☁•╃,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內☁•╃,浸泡1-2分鐘·◕·◕✘。根據需要☁•╃,重複此過程數次·◕·◕✘。

自動洗板·₪╃:如果有自動洗板機☁•╃,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求 

1.不能檢測含NaN3的樣品☁•╃,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性·◕·◕✘。

2.標本採集後儘早進行提取☁•╃,提取按相關文獻進行☁•╃,提取後應儘快進行實驗·◕·◕✘。若不能馬上進行試驗☁•╃,可將標本放於-20℃儲存☁•╃,但避免反覆凍融·◕·◕✘。

 

操作程式

  • 標準品的稀釋·₪╃:(本試劑盒提供原倍標準品一支☁•╃,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋·◕·◕✘。)

4000pg/ml

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

2000pg/ml

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

1000pg/ml

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

500pg/ml

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

250pg/ml

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  • 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數·◕·◕✘。每個標準品和空白孔建議做復孔·◕·◕✘。每個樣品根據自己的數量來定☁•╃,能使用復孔的儘量做復孔·◕·◕✘。
  • 加樣·₪╃:1)空白孔☁•╃,空白對照孔不加樣品☁•╃,生物素標記的抗SUFU抗體☁•╃,鏈黴親和素-HRP☁•╃,只加顯色劑A&B和終止液☁•╃,其餘各步操作相同;2)標準品孔·₪╃:加入標準品50ul☁•╃,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體☁•╃,故不加);3)待測樣品孔·₪╃:加入樣本40ul☁•╃,然後各加入抗SUFU抗體10ul✘│◕✘、鏈黴親和素-HRP50ul☁•╃,蓋上封板膜☁•╃,輕輕震盪混勻☁•╃,37℃溫育60分鐘·◕·◕✘。
  • 配液·₪╃:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用·◕·◕✘。
  • 洗滌·₪╃:小心揭掉封板膜☁•╃,棄去液體☁•╃,甩幹☁•╃,每孔加滿洗滌液☁•╃,靜置30秒後棄去☁•╃,如此重複5次☁•╃,拍幹·◕·◕✘。
  • 顯色·₪╃:每孔先加入顯色劑A50ul☁•╃,再加入顯色劑B50μl☁•╃,輕輕震盪混勻☁•╃,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止·₪╃:每孔加終止液50μl☁•╃,終止反應(此時藍色立轉黃色)·◕·◕✘。
  • 測定·₪╃:以空白空調零☁•╃,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)·◕·◕✘。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行·◕·◕✘。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程☁•╃,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度·◕·◕✘。也可以使用各種應用軟體來計算·◕·◕✘。

 

操作程式總結·₪╃:

試劑盒效能·₪╃:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上·◕·◕✘。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍·₪╃:

檢測範圍·₪╃:50pg/ml4000pg/ml·◕·◕✘。

 

儲存條件及有效期·₪╃:

儲存·₪╃:2-8·◕·◕✘。

有效期·₪╃:6個月(2-8℃)     

 
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