大鼠神經膠質纖維酸性蛋白（GFAP）酶聯免疫 檢測試劑盒使用說明書 AE96335Hu 使用前仔細閱讀本說明書·☁•。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理•╃▩↟╃，來檢測大鼠神經膠質纖維酸性蛋白（GFAP）•╃▩↟╃，只能用於研究用途•╃▩↟╃，不得用於醫學診斷·☁•。 用 途▩↟│▩：用於大鼠血清✘▩•↟↟、血漿及相關液體樣本中神經膠質纖維酸性蛋白（GFAP）測定·☁•。 工作原理 本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠神經膠質纖維酸性蛋白（GFAP）水平·☁•。向預先包被了大鼠神經膠質纖維酸性蛋白（GFAP）單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠神經膠質纖維酸性蛋白（GFAP）•╃▩↟╃，溫育；溫育後•╃▩↟╃，加入生物素標記的抗神經膠質纖維酸性蛋白（GFAP）抗體·☁•。再與鏈黴親和素-HRP結合•╃▩↟╃，形成免疫複合物•╃▩↟╃，再經過溫育和洗滌•╃▩↟╃，去除未結合的酶•╃▩↟╃，然後加入底物A✘▩•↟↟、B•╃▩↟╃，產生藍色•╃▩↟╃，並在酸的作用下轉化成終的黃色·☁•。顏色的深淺與樣品中大鼠神經膠質纖維酸性蛋白（GFAP）的濃度呈正相關·☁•。 試劑盒組成 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 儲存 | 說明書 | 1份 | 1份 | | 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | | 密封袋 | 1個 | 1個 | | 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃儲存 | 標準品1600ng/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 標準品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 鏈黴親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 生物素標記的抗GFAP抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃儲存 |
需要而未提供的試劑和器材 - 37℃恆溫箱·☁•。
- 標準規格酶標儀·☁•。
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水•╃▩↟╃，
- 一次性試管
- 吸水紙
注意事項 - 從2-8℃取出的試劑盒•╃▩↟╃，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘·☁•。酶標包被板開封后如未用完•╃▩↟╃，板條應裝入密封袋中儲存·☁•。
- 各步加樣均應使用加樣器•╃▩↟╃，並經常校對其準確性•╃▩↟╃，以避免試驗誤差
- 嚴格按照說明書的操作進行•╃▩↟╃，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
- 為避免交叉汙染•╃▩↟╃，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜·☁•。
- 不用的其它試劑應包裝好或蓋好·☁•。不同批號的試劑不要混用·☁•。保質前使用·☁•。
- 底物B對光敏感•╃▩↟╃，避免長時間暴露於光下·☁•。
洗板方法 手工洗板方法▩↟│▩：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙•╃▩↟╃，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內•╃▩↟╃，浸泡1-2分鐘·☁•。根據需要•╃▩↟╃，重複此過程數次·☁•。 自動洗板▩↟│▩：如果有自動洗板機•╃▩↟╃，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中 標本要求 1．不能檢測含NaN3的樣品•╃▩↟╃，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性·☁•。 2．標本採集後儘早進行提取•╃▩↟╃，提取按相關文獻進行•╃▩↟╃，提取後應儘快進行實驗·☁•。若不能馬上進行試驗•╃▩↟╃，可將標本放於-20℃儲存•╃▩↟╃，但應避免反覆凍融·☁•。 操作程式 - 標準品的稀釋▩↟│▩：(本試劑盒提供原倍標準品一支•╃▩↟╃，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋·☁•。)
800ng/L | 5號標準品 | 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液 | 400ng/L | 4號標準品 | 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 200ng/L | 3號標準品 | 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 100ng/L | 2號標準品 | 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 50ng/L | 1號標準品 | 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
- 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數·☁•。每個標準品和空白孔建議做復孔·☁•。每個樣品根據自己的數量來定•╃▩↟╃，能使用復孔的儘量做復孔·☁•。
- 加樣▩↟│▩：1）空白孔•╃▩↟╃，空白對照孔不加樣品•╃▩↟╃，生物素標記的抗GFAP抗體•╃▩↟╃，鏈黴親和素-HRP•╃▩↟╃，只加顯色劑A&B和終止液•╃▩↟╃，其餘各步操作相同；2）標準品孔▩↟│▩：加入標準品50ul•╃▩↟╃，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體•╃▩↟╃，故不加)；3）代測樣品孔▩↟│▩：加入樣本40ul•╃▩↟╃，然後各加入抗GFAP抗體10ul✘▩•↟↟、鏈黴親和素-HRP50ul•╃▩↟╃，蓋上封板膜•╃▩↟╃，輕輕震盪混勻•╃▩↟╃，37℃溫育60分鐘·☁•。
- 配液▩↟│▩：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用·☁•。
- 洗滌▩↟│▩：小心揭掉封板膜•╃▩↟╃，棄去液體•╃▩↟╃，甩幹•╃▩↟╃，每孔加滿洗滌液•╃▩↟╃，靜置30秒後棄去•╃▩↟╃，如此重複5次•╃▩↟╃，拍幹·☁•。
- 顯色▩↟│▩：每孔先加入顯色劑A50ul•╃▩↟╃，再加入顯色劑B50μl•╃▩↟╃，輕輕震盪混勻•╃▩↟╃，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止▩↟│▩：每孔加終止液50μl•╃▩↟╃，終止反應（此時藍色立轉黃色）·☁•。
- 測定▩↟│▩：以空白空調零•╃▩↟╃，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）·☁•。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行·☁•。
- 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程•╃▩↟╃，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度·☁•。也可以使用各種應用軟體來計算·☁•。
操作程式總結▩↟│▩： 
試劑盒效能▩↟│▩： 1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上·☁•。 2.批內與批間應分別小於9%和15% 檢測範圍▩↟│▩： 檢測範圍▩↟│▩：25ng/L - 800ng/L 儲存條件及有效期▩↟│▩： 儲存▩↟│▩：2-8℃·☁•。 有效期▩↟│▩：6個月(2-8℃)·☁•。 |
