大鼠羥脯氨酸(Hyp)酶聯免疫

                                   檢測試劑盒使用說明書         AE90789Ra

   使用前仔細閱讀本說明書│☁✘☁。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理✘✘，來檢測大鼠羥脯氨酸(Hyp)✘✘，只能用於研究用途✘✘，不得用於醫學診斷│☁✘☁。

用    途•₪✘✘：用於大鼠血清▩·•│、血漿及相關液體樣本中羥脯氨酸(Hyp)測定│☁✘☁。

工作原理

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠羥脯氨酸(Hyp)水平│☁✘☁。向預先包被了大鼠羥脯氨酸(Hyp)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠羥脯氨酸(Hyp)✘✘，溫育；溫育後✘✘，加入生物素標記的抗Hyp抗體│☁✘☁。再與鏈黴親和素-HRP結合✘✘，形成免疫複合物✘✘，再經過溫育和洗滌✘✘，去除未結合的酶✘✘，然後加入底物A▩·•│、B✘✘，產生藍色✘✘，並在酸的作用下轉化成終的黃色│☁✘☁。顏色的深淺與樣品中大鼠羥脯氨酸(Hyp)的濃度呈正相關│☁✘☁。

試劑盒組成 

需要而未提供的試劑和器材

• 37℃恆溫箱│☁✘☁。
• 標準規格酶標儀│☁✘☁。
• 精密移液器及一次性吸頭
• 蒸餾水✘✘，
• 一次性試管
• 吸水紙

注意事項

• 從2-8℃取出的試劑盒✘✘，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘│☁✘☁。酶標包被板開封后如未用完✘✘，板條應裝入密封袋中儲存│☁✘☁。
• 各步加樣均應使用加樣器✘✘，並經常校對其準確性✘✘，以避免試驗誤差
• 嚴格按照說明書的操作進行✘✘，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
• 為避免交叉汙染✘✘，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜│☁✘☁。
• 不用的其它試劑應包裝好或蓋好│☁✘☁。不同批號的試劑不要混用│☁✘☁。保質前使用│☁✘☁。
• 底物B對光敏感✘✘，避免長時間暴露於光下│☁✘☁。

洗板方法

手工洗板方法•₪✘✘：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙✘✘，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內✘✘，浸泡1-2分鐘│☁✘☁。根據需要✘✘，重複此過程數次│☁✘☁。

自動洗板•₪✘✘：如果有自動洗板機✘✘，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求 

1．不能檢測含NaN3的樣品✘✘，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性│☁✘☁。

2．標本採集後儘早進行提取✘✘，提取按相關文獻進行✘✘，提取後應儘快進行實驗│☁✘☁。若不能馬上進行試驗✘✘，可將標本放於-20℃儲存✘✘，但應避免反覆凍融│☁✘☁。

操作程式

• 標準品的稀釋•₪✘✘：(本試劑盒提供原倍標準品一支✘✘，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋│☁✘☁。)

• 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數│☁✘☁。每個標準品和空白孔建議做復孔│☁✘☁。每個樣品根據自己的數量來定✘✘，能使用復孔的儘量做復孔│☁✘☁。
• 加樣•₪✘✘：1）空白孔✘✘，空白對照孔不加樣品✘✘，生物素標記的抗Hyp抗體✘✘，鏈黴親和素-HRP✘✘，只加顯色劑A&B和終止液✘✘，其餘各步操作相同；2）標準品孔•₪✘✘：加入標準品50ul✘✘，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體✘✘，故不加)；3）代測樣品孔•₪✘✘：加入樣本40ul✘✘，然後各加入抗Hyp抗體10ul▩·•│、鏈黴親和素-HRP50ul✘✘，蓋上封板膜✘✘，輕輕震盪混勻✘✘，37℃溫育60分鐘│☁✘☁。
• 配液•₪✘✘：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用│☁✘☁。
• 洗滌•₪✘✘：小心揭掉封板膜✘✘，棄去液體✘✘，甩幹✘✘，每孔加滿洗滌液✘✘，靜置30秒後棄去✘✘，如此重複5次✘✘，拍幹│☁✘☁。
• 顯色•₪✘✘：每孔先加入顯色劑A50ul✘✘，再加入顯色劑B50μl✘✘，輕輕震盪混勻✘✘，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止•₪✘✘：每孔加終止液50μl✘✘，終止反應（此時藍色立轉黃色）│☁✘☁。
• 測定•₪✘✘：以空白空調零✘✘，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）│☁✘☁。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行│☁✘☁。
• 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程✘✘，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度│☁✘☁。也可以使用各種應用軟體來計算│☁✘☁。

操作程式總結•₪✘✘：

試劑盒效能•₪✘✘：

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上│☁✘☁。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

檢測範圍•₪✘✘：

檢測範圍•₪✘✘：0-40μg/L│☁✘☁。

儲存條件及有效期•₪✘✘：

儲存•₪✘✘：2-8℃│☁✘☁。

有效期•₪✘✘：6個月(2-8℃)│☁✘☁。