大鼠內酯酶（LAS）酶聯免疫

                 檢測試劑盒使用說明書     AE96335Hu

   使用前仔細閱讀本說明書↟↟✘。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理↟·☁，來檢測大鼠內酯酶（LAS）↟·☁，只能用於研究用途↟·☁，不得用於醫學診斷↟↟✘。

用  途↟▩▩·☁：用於大鼠血清▩╃↟₪₪、血漿及相關液體樣本中內酯酶（LAS）測定↟↟✘。

工作原理↟▩▩·☁：

   本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠內酯酶（LAS）水平↟↟✘。向預先包被了大鼠內酯酶（LAS）單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠內酯酶（LAS）↟·☁，溫育；溫育後↟·☁，加入生物素標記的抗內酯酶（LAS）抗體↟↟✘。再與鏈黴親和素-HRP結合↟·☁，形成免疫複合物↟·☁，再經過溫育和洗滌↟·☁，去除未結合的酶↟·☁，然後加入底物A▩╃↟₪₪、B↟·☁，產生藍色↟·☁，並在酸的作用下轉化成終的黃色↟↟✘。顏色的深淺與樣品中大鼠內酯酶（LAS）的濃度呈正相關↟↟✘。

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1. 37℃恆溫箱↟↟✘。
2. 標準規格酶標儀↟↟✘。
3. 精密移液器及一次性吸頭
4. 蒸餾水↟·☁，
5. 一次性試管
6. 吸水紙

注意事項

1. 從2-8℃取出的試劑盒↟·☁，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘↟↟✘。酶標包被板開封后如未用完↟·☁，板條應裝入密封袋中儲存↟↟✘。
2. 各步加樣均應使用加樣器↟·☁，並經常校對其準確性↟·☁，以避免試驗誤差
3. 嚴格按照說明書的操作進行↟·☁，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
4. 為避免交叉汙染↟·☁，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜↟↟✘。
5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好↟↟✘。不同批號的試劑不要混用↟↟✘。保質前使用↟↟✘。
6. 底物B對光敏感↟·☁，避免長時間暴露於光下↟↟✘。

洗板方法

手工洗板方法↟▩▩·☁：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙↟·☁，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內↟·☁，浸泡1-2分鐘↟↟✘。根據需要↟·☁，重複此過程數次↟↟✘。

自動洗板↟▩▩·☁：如果有自動洗板機↟·☁，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品↟·☁，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性↟↟✘。

2．標本採集後儘早進行提取↟·☁，提取按相關文獻進行↟·☁，提取後應儘快進行實驗↟↟✘。若不能馬上進行試驗↟·☁，可將標本放於-20℃儲存↟·☁，但應避免反覆凍融↟↟✘。

操作程式

1. 標準品的稀釋↟▩▩·☁：(本試劑盒提供原倍標準品一支↟·☁，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟↟✘。)

   240 ng/L	5號標準品	120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液
   120 ng/L	4號標準品	120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液
   60 ng/L	3號標準品	120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液
   30 ng/L	2號標準品	120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液
   15 ng/L	1號標準品	120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

2. 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數↟↟✘。每個標準品和空白孔建議做復孔↟↟✘。每個樣品根據自己的數量來定↟·☁，能使用復孔的儘量做復孔↟↟✘。
3. 加樣↟▩▩·☁：1）空白孔↟·☁，空白對照孔不加樣品↟·☁，生物素標記的抗LAS抗體↟·☁，鏈黴親和素-HRP↟·☁，只加顯色劑A&B和終止液↟·☁，其餘各步操作相同；2）標準品孔↟▩▩·☁：加入標準品50ul↟·☁，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體↟·☁，故不加)；3）代測樣品孔↟▩▩·☁：加入樣本40ul↟·☁，然後各加入抗LAS抗體10ul▩╃↟₪₪、鏈黴親和素-HRP50ul↟·☁，蓋上封板膜↟·☁，輕輕震盪混勻↟·☁，37℃溫育60分鐘↟↟✘。
4. 配液↟▩▩·☁：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用↟↟✘。
5. 洗滌↟▩▩·☁：小心揭掉封板膜↟·☁，棄去液體↟·☁，甩幹↟·☁，每孔加滿洗滌液↟·☁，靜置30秒後棄去↟·☁，如此重複5次↟·☁，拍幹↟↟✘。
6. 顯色↟▩▩·☁：每孔先加入顯色劑A50ul↟·☁，再加入顯色劑B50μl↟·☁，輕輕震盪混勻↟·☁，37℃避光顯色15分鐘.
7. 終止↟▩▩·☁：每孔加終止液50μl↟·☁，終止反應（此時藍色立轉黃色）↟↟✘。
8. 測定↟▩▩·☁：以空白空調零↟·☁，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）↟↟✘。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行↟↟✘。
9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程↟·☁，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度↟↟✘。也可以使用各種應用軟體來計算↟↟✘。

操作程式總結↟▩▩·☁：

試劑盒效能↟▩▩·☁：

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上↟↟✘。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

檢測範圍↟▩▩·☁：

檢測範圍↟▩▩·☁：8ng/L -240 ng/L

儲存條件及有效期↟▩▩·☁：

儲存↟▩▩·☁：2-8℃↟↟✘。

有效期↟▩▩·☁：6個月(2-8℃)↟↟✘。