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大鼠內酯酶(LAS)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數↟▩▩·☁:640 釋出時間↟▩▩·☁:2019/7/26
提 供 商↟▩▩·☁: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小↟▩▩·☁:
圖片型別↟▩▩·☁: 下載次數↟▩▩·☁: 109
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大鼠內酯酶(LAS)酶聯免疫

                 檢測試劑盒使用說明書     AE96335Hu

   使用前仔細閱讀本說明書↟↟✘。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理↟·☁,來檢測大鼠內酯酶(LAS)↟·☁,只能用於研究用途↟·☁,不得用於醫學診斷↟↟✘。

用  途↟▩▩·☁:用於大鼠血清▩╃↟₪₪、血漿及相關液體樣本中內酯酶(LAS)測定↟↟✘。

工作原理↟▩▩·☁:

   本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中大鼠內酯酶(LAS)水平↟↟✘。向預先包被了大鼠內酯酶(LAS)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠內酯酶(LAS)↟·☁,溫育;溫育後↟·☁,加入生物素標記的抗內酯酶(LAS)抗體↟↟✘。再與鏈黴親和素-HRP結合↟·☁,形成免疫複合物↟·☁,再經過溫育和洗滌↟·☁,去除未結合的酶↟·☁,然後加入底物A▩╃↟₪₪、B↟·☁,產生藍色↟·☁,並在酸的作用下轉化成終的黃色↟↟✘。顏色的深淺與樣品中大鼠內酯酶(LAS)的濃度呈正相關↟↟✘。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品480ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗LAS抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材

  1. 37℃恆溫箱↟↟✘。
  2. 標準規格酶標儀↟↟✘。
  3. 精密移液器及一次性吸頭
  4. 蒸餾水↟·☁,
  5. 一次性試管
  6. 吸水紙

注意事項

  1. 從2-8℃取出的試劑盒↟·☁,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘↟↟✘。酶標包被板開封后如未用完↟·☁,板條應裝入密封袋中儲存↟↟✘。
  2. 各步加樣均應使用加樣器↟·☁,並經常校對其準確性↟·☁,以避免試驗誤差
  3. 嚴格按照說明書的操作進行↟·☁,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  4. 為避免交叉汙染↟·☁,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜↟↟✘。
  5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好↟↟✘。不同批號的試劑不要混用↟↟✘。保質前使用↟↟✘。
  6. 底物B對光敏感↟·☁,避免長時間暴露於光下↟↟✘。

洗板方法

手工洗板方法↟▩▩·☁:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙↟·☁,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內↟·☁,浸泡1-2分鐘↟↟✘。根據需要↟·☁,重複此過程數次↟↟✘。

自動洗板↟▩▩·☁:如果有自動洗板機↟·☁,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求

1不能檢測含NaN3的樣品↟·☁,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性↟↟✘。

2.標本採集後儘早進行提取↟·☁,提取按相關文獻進行↟·☁,提取後應儘快進行實驗↟↟✘。若不能馬上進行試驗↟·☁,可將標本放於-20℃儲存↟·☁,但應避免反覆凍融↟↟✘。

操作程式

  1. 標準品的稀釋↟▩▩·☁:(本試劑盒提供原倍標準品一支↟·☁,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟↟✘。)

    240 ng/L

    5號標準品

    120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

    120 ng/L

    4號標準品

    120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

    60 ng/L

    3號標準品

    120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

    30 ng/L

    2號標準品

    120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

    15 ng/L

    1號標準品

    120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  2. 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數↟↟✘。每個標準品和空白孔建議做復孔↟↟✘。每個樣品根據自己的數量來定↟·☁,能使用復孔的儘量做復孔↟↟✘。
  3. 加樣↟▩▩·☁:1)空白孔↟·☁,空白對照孔不加樣品↟·☁,生物素標記的抗LAS抗體↟·☁,鏈黴親和素-HRP↟·☁,只加顯色劑A&B和終止液↟·☁,其餘各步操作相同;2)標準品孔↟▩▩·☁:加入標準品50ul↟·☁,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體↟·☁,故不加);3)代測樣品孔↟▩▩·☁:加入樣本40ul↟·☁,然後各加入抗LAS抗體10ul▩╃↟₪₪、鏈黴親和素-HRP50ul↟·☁,蓋上封板膜↟·☁,輕輕震盪混勻↟·☁,37℃溫育60分鐘↟↟✘。
  4. 配液↟▩▩·☁:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用↟↟✘。
  5. 洗滌↟▩▩·☁:小心揭掉封板膜↟·☁,棄去液體↟·☁,甩幹↟·☁,每孔加滿洗滌液↟·☁,靜置30秒後棄去↟·☁,如此重複5次↟·☁,拍幹↟↟✘。
  6. 顯色↟▩▩·☁:每孔先加入顯色劑A50ul↟·☁,再加入顯色劑B50μl↟·☁,輕輕震盪混勻↟·☁,37℃避光顯色15分鐘.
  7. 終止↟▩▩·☁:每孔加終止液50μl↟·☁,終止反應(此時藍色立轉黃色)↟↟✘。
  8. 測定↟▩▩·☁:以空白空調零↟·☁,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)↟↟✘。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行↟↟✘。
  9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程↟·☁,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度↟↟✘。也可以使用各種應用軟體來計算↟↟✘。

操作程式總結↟▩▩·☁:

 

試劑盒效能↟▩▩·☁:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上↟↟✘。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

檢測範圍↟▩▩·☁:

檢測範圍↟▩▩·☁:8ng/L -240 ng/L

儲存條件及有效期↟▩▩·☁:

儲存↟▩▩·☁:2-8℃↟↟✘。

有效期↟▩▩·☁:6個月(2-8℃)↟↟✘。

 
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