大鼠免疫球蛋白A(IgA)酶聯免疫檢測

                試劑盒使用說明書           AE90714Ra

    使用前仔細閱讀本說明書↟╃╃☁✘。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理✘₪，來檢測大鼠免疫球蛋白A(IgA)✘₪，只能用於研究用途✘₪，不得用於醫學診斷↟╃╃☁✘。

用  途│·：用於大鼠血清▩▩₪··、尿液及相關液體樣本中免疫球蛋白A(IgA)測定↟╃╃☁✘。

工作原理│·：

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠免疫球蛋白A(IgA)水平↟╃╃☁✘。向預先包被了大鼠免疫球蛋白A(IgA)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠免疫球蛋白A(IgA)✘₪，溫育；溫育後✘₪，加入生物素標記的抗免疫球蛋白A(IgA)抗體↟╃╃☁✘。再與鏈黴親和素-HRP結合✘₪，形成免疫複合物✘₪，再經過溫育和洗滌✘₪，去除未結合的酶✘₪，然後加入底物A▩▩₪··、B✘₪，產生藍色✘₪，並在酸的作用下轉化成終的黃色↟╃╃☁✘。顏色的深淺與樣品中大鼠免疫球蛋白A(IgA)的濃度呈正相關↟╃╃☁✘。

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1. 37℃恆溫箱↟╃╃☁✘。
2. 標準規格酶標儀↟╃╃☁✘。
3. 精密移液器及一次性吸頭
4. 蒸餾水✘₪，
5. 一次性試管
6. 吸水紙

注意事項

1. 從2-8℃取出的試劑盒✘₪，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘↟╃╃☁✘。酶標包被板開封后如未用完✘₪，板條應裝入密封袋中儲存↟╃╃☁✘。
2. 各步加樣均應使用加樣器✘₪，並經常校對其準確性✘₪，以避免試驗誤差
3. 嚴格按照說明書的操作進行✘₪，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
4. 為避免交叉汙染✘₪，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜↟╃╃☁✘。
5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好↟╃╃☁✘。不同批號的試劑不要混用↟╃╃☁✘。保質前使用↟╃╃☁✘。
6. 底物B對光敏感✘₪，避免長時間暴露於光下↟╃╃☁✘。

洗板方法

手工洗板方法│·：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙✘₪，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內✘₪，浸泡1-2分鐘↟╃╃☁✘。根據需要✘₪，重複此過程數次↟╃╃☁✘。

自動洗板│·：如果有自動洗板機✘₪，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品✘₪，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性↟╃╃☁✘。

2．標本採集後儘早進行提取✘₪，提取按相關文獻進行✘₪，提取後應儘快進行實驗↟╃╃☁✘。若不能馬上進行試驗✘₪，可將標本放於-20℃儲存✘₪，但應避免反覆凍融↟╃╃☁✘。

操作程式

1. 標準品的稀釋│·：(本試劑盒提供原倍標準品一支✘₪，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟╃╃☁✘。)

   120 μg/ml	5號標準品	120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液
   60 μg/ml	4號標準品	120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液
   30 μg/ml	3號標準品	120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液
   15 μg/ml	2號標準品	120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液
   7.5 μg/ml	1號標準品	120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數↟╃╃☁✘。每個標準品和空白孔建議做復孔↟╃╃☁✘。每個樣品根據自己的數量來定✘₪，能使用復孔的儘量做復孔↟╃╃☁✘。
3. 加樣│·：1）空白孔✘₪，空白對照孔不加樣品✘₪，生物素標記的抗IgA抗體✘₪，鏈黴親和素-HRP✘₪，只加顯色劑A&B和終止液✘₪，其餘各步操作相同；2）標準品孔│·：加入標準品50ul✘₪，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體✘₪，故不加)；3）待測樣品孔│·：加入樣本40ul✘₪，然後各加入抗IgA抗體10ul▩▩₪··、鏈黴親和素-HRP50ul✘₪，蓋上封板膜✘₪，輕輕震盪混勻✘₪，37℃溫育60分鐘↟╃╃☁✘。
4. 配液│·：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用↟╃╃☁✘。
5. 洗滌│·：小心揭掉封板膜✘₪，棄去液體✘₪，甩幹✘₪，每孔加滿洗滌液✘₪，靜置30秒後棄去✘₪，如此重複5次✘₪，拍幹↟╃╃☁✘。
6. 顯色│·：每孔先加入顯色劑A50ul✘₪，再加入顯色劑B50μl✘₪，輕輕震盪混勻✘₪，37℃避光顯色15分鐘.
7. 終止│·：每孔加終止液50μl✘₪，終止反應（此時藍色立轉黃色）↟╃╃☁✘。
8. 測定│·：以空白空調零✘₪，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）↟╃╃☁✘。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行↟╃╃☁✘。
9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程✘₪，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度↟╃╃☁✘。也可以使用各種應用軟體來計算↟╃╃☁✘。

操作程式總結│·：

試劑盒效能│·：

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上↟╃╃☁✘。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

檢測範圍│·：

檢測範圍│·：1.5μg/ml→120μg/ml.

儲存條件及有效期│·：

儲存│·：2-8℃↟╃╃☁✘。

有效期│·：6個月(2-8℃)↟╃╃☁✘。