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大鼠免疫球蛋白A(IgA)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數│·:543 釋出時間│·:2019/7/19
提 供 商│·: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小│·:
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大鼠免疫球蛋白A(IgA)酶聯免疫檢測

                試劑盒使用說明書           AE90714Ra

    使用前仔細閱讀本說明書↟╃╃☁✘。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理✘₪,來檢測大鼠免疫球蛋白A(IgA)✘₪,只能用於研究用途✘₪,不得用於醫學診斷↟╃╃☁✘。

用  途│·:用於大鼠血清▩▩₪··、尿液及相關液體樣本中免疫球蛋白A(IgA)測定↟╃╃☁✘。

工作原理│·:

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中大鼠免疫球蛋白A(IgA)水平↟╃╃☁✘。向預先包被了大鼠免疫球蛋白A(IgA)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠免疫球蛋白A(IgA)✘₪,溫育;溫育後✘₪,加入生物素標記的抗免疫球蛋白A(IgA)抗體↟╃╃☁✘。再與鏈黴親和素-HRP結合✘₪,形成免疫複合物✘₪,再經過溫育和洗滌✘₪,去除未結合的酶✘₪,然後加入底物A▩▩₪··、B✘₪,產生藍色✘₪,並在酸的作用下轉化成終的黃色↟╃╃☁✘。顏色的深淺與樣品中大鼠免疫球蛋白A(IgA)的濃度呈正相關↟╃╃☁✘。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品│·:240μg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗IgA抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

需要而未提供的試劑和器材

  1. 37℃恆溫箱↟╃╃☁✘。
  2. 標準規格酶標儀↟╃╃☁✘。
  3. 精密移液器及一次性吸頭
  4. 蒸餾水✘₪,
  5. 一次性試管
  6. 吸水紙

注意事項

  1. 從2-8℃取出的試劑盒✘₪,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘↟╃╃☁✘。酶標包被板開封后如未用完✘₪,板條應裝入密封袋中儲存↟╃╃☁✘。
  2. 各步加樣均應使用加樣器✘₪,並經常校對其準確性✘₪,以避免試驗誤差
  3. 嚴格按照說明書的操作進行✘₪,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  4. 為避免交叉汙染✘₪,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜↟╃╃☁✘。
  5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好↟╃╃☁✘。不同批號的試劑不要混用↟╃╃☁✘。保質前使用↟╃╃☁✘。
  6. 底物B對光敏感✘₪,避免長時間暴露於光下↟╃╃☁✘。

洗板方法

手工洗板方法│·:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙✘₪,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內✘₪,浸泡1-2分鐘↟╃╃☁✘。根據需要✘₪,重複此過程數次↟╃╃☁✘。

自動洗板│·:如果有自動洗板機✘₪,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求

1不能檢測含NaN3的樣品✘₪,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性↟╃╃☁✘。

2.標本採集後儘早進行提取✘₪,提取按相關文獻進行✘₪,提取後應儘快進行實驗↟╃╃☁✘。若不能馬上進行試驗✘₪,可將標本放於-20℃儲存✘₪,但應避免反覆凍融↟╃╃☁✘。

操作程式

  1. 標準品的稀釋│·:(本試劑盒提供原倍標準品一支✘₪,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟╃╃☁✘。)

    120 μg/ml

    5號標準品

    120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

    60 μg/ml

    4號標準品

    120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

    30 μg/ml

    3號標準品

    120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

    15 μg/ml

    2號標準品

    120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

    7.5 μg/ml

    1號標準品

    120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數↟╃╃☁✘。每個標準品和空白孔建議做復孔↟╃╃☁✘。每個樣品根據自己的數量來定✘₪,能使用復孔的儘量做復孔↟╃╃☁✘。
  3. 加樣│·:1)空白孔✘₪,空白對照孔不加樣品✘₪,生物素標記的抗IgA抗體✘₪,鏈黴親和素-HRP✘₪,只加顯色劑A&B和終止液✘₪,其餘各步操作相同;2)標準品孔│·:加入標準品50ul✘₪,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體✘₪,故不加);3)待測樣品孔│·:加入樣本40ul✘₪,然後各加入抗IgA抗體10ul▩▩₪··、鏈黴親和素-HRP50ul✘₪,蓋上封板膜✘₪,輕輕震盪混勻✘₪,37℃溫育60分鐘↟╃╃☁✘。
  4. 配液│·:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用↟╃╃☁✘。
  5. 洗滌│·:小心揭掉封板膜✘₪,棄去液體✘₪,甩幹✘₪,每孔加滿洗滌液✘₪,靜置30秒後棄去✘₪,如此重複5次✘₪,拍幹↟╃╃☁✘。
  6. 顯色│·:每孔先加入顯色劑A50ul✘₪,再加入顯色劑B50μl✘₪,輕輕震盪混勻✘₪,37℃避光顯色15分鐘.
  7. 終止│·:每孔加終止液50μl✘₪,終止反應(此時藍色立轉黃色)↟╃╃☁✘。
  8. 測定│·:以空白空調零✘₪,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)↟╃╃☁✘。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行↟╃╃☁✘。
  9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程✘₪,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度↟╃╃☁✘。也可以使用各種應用軟體來計算↟╃╃☁✘。

操作程式總結│·:

試劑盒效能│·:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上↟╃╃☁✘。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍│·:

檢測範圍│·:1.5μg/ml120μg/ml.

 

儲存條件及有效期│·:

儲存│·:2-8℃↟╃╃☁✘。

有效期│·:6個月(2-8℃)↟╃╃☁✘。

 
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