大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)酶聯免疫 檢測試劑盒使用說明書 AE96335Hu 使用前仔細閱讀本說明書╃☁·。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理│₪•·，來檢測大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)│₪•·，只能用於研究用途│₪•·，不得用於醫學診斷╃☁·。 用 途▩•₪：用於大鼠血清·₪▩₪│、血漿及相關液體樣本中肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)測定╃☁·。 工作原理: 本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平╃☁·。向預先包被了大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)│₪•·，溫育；溫育後│₪•·，加入生物素標記的抗肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)抗體╃☁·。再與鏈黴親和素-HRP結合│₪•·，形成免疫複合物│₪•·，再經過溫育和洗滌│₪•·，去除未結合的酶│₪•·，然後加入底物A·₪▩₪│、B│₪•·，產生藍色│₪•·，並在酸的作用下轉化成終的黃色╃☁·。顏色的深淺與樣品中大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)的濃度呈正相關╃☁·。 試劑盒組成 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 儲存 | 說明書 | 1份 | 1份 | | 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | | 密封袋 | 1個 | 1個 | | 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃儲存 | 標準品48ng/ml | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 標準品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 鏈黴親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 生物素標記的抗CK-MB抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃儲存 |
需要而未提供的試劑和器材 - 37℃恆溫箱╃☁·。
- 標準規格酶標儀╃☁·。
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水│₪•·，
- 一次性試管
- 吸水紙
注意事項 - 從2-8℃取出的試劑盒│₪•·，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘╃☁·。酶標包被板開封后如未用完│₪•·，板條應裝入密封袋中儲存╃☁·。
- 各步加樣均應使用加樣器│₪•·，並經常校對其準確性│₪•·，以避免試驗誤差
- 嚴格按照說明書的操作進行│₪•·，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
- 為避免交叉汙染│₪•·，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜╃☁·。
- 不用的其它試劑應包裝好或蓋好╃☁·。不同批號的試劑不要混用╃☁·。保質前使用╃☁·。
- 底物B對光敏感│₪•·，避免長時間暴露於光下╃☁·。
洗板方法 手工洗板方法▩•₪：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙│₪•·，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內│₪•·，浸泡1-2分鐘╃☁·。根據需要│₪•·，重複此過程數次╃☁·。 自動洗板▩•₪：如果有自動洗板機│₪•·，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中 標本要求 1．不能檢測含NaN3的樣品│₪•·，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性╃☁·。 2．標本採集後儘早進行提取│₪•·，提取按相關文獻進行│₪•·，提取後應儘快進行實驗╃☁·。若不能馬上進行試驗│₪•·，可將標本放於-20℃儲存│₪•·，但應避免反覆凍融╃☁·。 操作程式 - 標準品的稀釋▩•₪：(本試劑盒提供原倍標準品一支│₪•·，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋╃☁·。
24ng/ml | 5號標準品 | 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液 | 12ng/ml | 4號標準品 | 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 6ng/ml | 3號標準品 | 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 3ng/ml | 2號標準品 | 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 1.5ng/ml | 1號標準品 | 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
- 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數╃☁·。每個標準品和空白孔建議做復孔╃☁·。每個樣品根據自己的數量來定│₪•·，能使用復孔的儘量做復孔╃☁·。
- 加樣▩•₪：1）空白孔│₪•·，空白對照孔不加樣品│₪•·，生物素標記的抗CK-MB抗體│₪•·，鏈黴親和素-HRP│₪•·，只加顯色劑A&B和終止液│₪•·，其餘各步操作相同；2）標準品孔▩•₪：加入標準品50ul│₪•·，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體│₪•·，故不加)；3）代測樣品孔▩•₪：加入樣本40ul│₪•·，然後各加入抗CK-MB抗體10ul·₪▩₪│、鏈黴親和素-HRP50ul│₪•·，蓋上封板膜│₪•·，輕輕震盪混勻│₪•·，37℃溫育60分鐘╃☁·。
- 配液▩•₪：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用╃☁·。
- 洗滌▩•₪：小心揭掉封板膜│₪•·，棄去液體│₪•·，甩幹│₪•·，每孔加滿洗滌液│₪•·，靜置30秒後棄去│₪•·，如此重複5次│₪•·，拍幹╃☁·。
- 顯色▩•₪：每孔先加入顯色劑A50ul│₪•·，再加入顯色劑B50μl│₪•·，輕輕震盪混勻│₪•·，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止▩•₪：每孔加終止液50μl│₪•·，終止反應（此時藍色立轉黃色）╃☁·。
- 測定▩•₪：以空白空調零│₪•·，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）╃☁·。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行╃☁·。
- 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程│₪•·，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度╃☁·。也可以使用各種應用軟體來計算╃☁·。
操作程式總結▩•₪： 
試劑盒效能▩•₪： 1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上╃☁·。 2.批內與批間應分別小於9%和15% 檢測範圍▩•₪： 檢測範圍▩•₪：0.8ng/ml - 24ng/ml 儲存條件及有效期▩•₪： 儲存▩•₪：2-8℃╃☁·。 有效期▩•₪：6個月(2-8℃)╃☁·。 |
