大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)酶聯免疫 檢測試劑盒使用說明書 AE96308Ra 使用前仔細閱讀本說明書╃◕☁。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理│◕↟，來檢測大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)│◕↟，只能用於研究用途│◕↟，不得用於醫學診斷╃◕☁。 用 途₪│◕·：用於大鼠血清│╃、血漿及相關液體樣本中高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)測定╃◕☁。 工作原理: 本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)水平╃◕☁。向預先包被了大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)│◕↟，溫育；溫育後│◕↟，加入生物素標記的抗高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)抗體╃◕☁。再與鏈黴親和素-HRP結合│◕↟，形成免疫複合物│◕↟，再經過溫育和洗滌│◕↟，去除未結合的酶│◕↟，然後加入底物A│╃、B│◕↟，產生藍色│◕↟，並在酸的作用下轉化成終的黃色╃◕☁。顏色的深淺與樣品中大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)的濃度呈正相關╃◕☁。 試劑盒組成 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 儲存 | 說明書 | 1份 | 1份 | | 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | | 密封袋 | 1個 | 1個 | | 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃儲存 | 標準品80μIU/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 標準品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 鏈黴親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 生物素標記的抗U-TSH抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃儲存 |
需要而未提供的試劑和器材 - 37℃恆溫箱╃◕☁。
- 標準規格酶標儀╃◕☁。
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水│◕↟，
- 一次性試管
- 吸水紙
注意事項 - 從2-8℃取出的試劑盒│◕↟，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘╃◕☁。酶標包被板開封后如未用完│◕↟，板條應裝入密封袋中儲存╃◕☁。
- 各步加樣均應使用加樣器│◕↟，並經常校對其準確性│◕↟，以避免試驗誤差
- 嚴格按照說明書的操作進行│◕↟，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
- 為避免交叉汙染│◕↟，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜╃◕☁。
- 不用的其它試劑應包裝好或蓋好╃◕☁。不同批號的試劑不要混用╃◕☁。保質前使用╃◕☁。
- 底物B對光敏感│◕↟，避免長時間暴露於光下╃◕☁。
洗板方法 手工洗板方法₪│◕·：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙│◕↟，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內│◕↟，浸泡1-2分鐘╃◕☁。根據需要│◕↟，重複此過程數次╃◕☁。 自動洗板₪│◕·：如果有自動洗板機│◕↟，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中 標本要求 1．不能檢測含NaN3的樣品│◕↟，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性╃◕☁。 2．標本採集後儘早進行提取│◕↟，提取按相關文獻進行│◕↟，提取後應儘快進行實驗╃◕☁。若不能馬上進行試驗│◕↟，可將標本放於-20℃儲存│◕↟，但應避免反覆凍融╃◕☁。 操作程式 - 標準品的稀釋₪│◕·：(本試劑盒提供原倍標準品一支│◕↟，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋╃◕☁。)
40μIU/L | 5號標準品 | 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液 | 20 μIU/L | 4號標準品 | 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 10 μIU/L | 3號標準品 | 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 5 μIU/L | 2號標準品 | 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 2.5 μIU/L | 1號標準品 | 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
- 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數╃◕☁。每個標準品和空白孔建議做復孔╃◕☁。每個樣品根據自己的數量來定│◕↟，能使用復孔的儘量做復孔╃◕☁。
- 加樣₪│◕·：1）空白孔│◕↟，空白對照孔不加樣品│◕↟，生物素標記的抗U-TSH抗體│◕↟，鏈黴親和素-HRP│◕↟，只加顯色劑A&B和終止液│◕↟，其餘各步操作相同；2）標準品孔₪│◕·：加入標準品50ul│◕↟，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體│◕↟，故不加)；3）代測樣品孔₪│◕·：加入樣本40ul│◕↟，然後各加入抗U-TSH抗體10ul│╃、鏈黴親和素-HRP50ul│◕↟，蓋上封板膜│◕↟，輕輕震盪混勻│◕↟，37℃溫育60分鐘╃◕☁。
- 配液₪│◕·：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用╃◕☁。
- 洗滌₪│◕·：小心揭掉封板膜│◕↟，棄去液體│◕↟，甩幹│◕↟，每孔加滿洗滌液│◕↟，靜置30秒後棄去│◕↟，如此重複5次│◕↟，拍幹╃◕☁。
- 顯色₪│◕·：每孔先加入顯色劑A50ul│◕↟，再加入顯色劑B50μl│◕↟，輕輕震盪混勻│◕↟，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止₪│◕·：每孔加終止液50μl│◕↟，終止反應（此時藍色立轉黃色）╃◕☁。
- 測定₪│◕·：以空白空調零│◕↟，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）╃◕☁。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行╃◕☁。
- 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程│◕↟，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度╃◕☁。也可以使用各種應用軟體來計算╃◕☁。
操作程式總結₪│◕·： 
試劑盒效能₪│◕·： 1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上╃◕☁。 2.批內與批間應分別小於9%和15% 檢測範圍₪│◕·： 檢測範圍₪│◕·：1.0 μIU/L -50μIU/L 儲存條件及有效期₪│◕·： 儲存₪│◕·：2-8℃╃◕☁。 有效期₪│◕·：6個月(2-8℃)╃◕☁。 |
