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大鼠丙二醛(MDA)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數•☁:672 釋出時間•☁:2019/6/14
提 供 商•☁: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小•☁:
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資料型別•☁: DOC 瀏覽次數•☁: 672
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     大鼠丙二醛(MDA)酶聯免疫檢測

                試劑盒使用說明書        

                                            AE90765Ra

   使用前仔細閱讀本說明書│╃。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理₪╃☁▩,來檢測大鼠丙二醛(MDA)₪╃☁▩,只能用於研究用途₪╃☁▩,不得用於醫學診斷│╃。

 

用  途•☁:用於大鼠血清◕│••▩、血漿及相關液體樣本中丙二醛(MDA)測定│╃。

 

工作原理:

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中大鼠丙二醛(MDA)水平│╃。向預先包被了丙二醛(MDA)單克隆抗體的酶標孔中加入丙二醛(MDA)₪╃☁▩,溫育;溫育後₪╃☁▩,加入生物素標記的抗丙二醛(MDA)抗體│╃。再與鏈黴親和素-HRP結合₪╃☁▩,形成免疫複合物₪╃☁▩,再經過溫育和洗滌₪╃☁▩,去除未結合的酶₪╃☁▩,然後加入底物A◕│••▩、B₪╃☁▩,產生藍色₪╃☁▩,並在酸的作用下轉化成終的黃色│╃。顏色的深淺與樣品中丙二醛(MDA)的濃度呈正相關│╃。

 

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品32 nmol/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗MDA抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材

  1. 37℃恆溫箱│╃。
  2. 標準規格酶標儀│╃。
  3. 精密移液器及一次性吸頭
  4. 蒸餾水₪╃☁▩,
  5. 一次性試管
  6. 吸水紙

 

注意事項

  1. 從2-8℃取出的試劑盒₪╃☁▩,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘│╃。酶標包被板開封后如未用完₪╃☁▩,板條應裝入密封袋中儲存│╃。
  2. 各步加樣均應使用加樣器₪╃☁▩,並經常校對其準確性₪╃☁▩,以避免試驗誤差
  3. 嚴格按照說明書的操作進行₪╃☁▩,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  4. 為避免交叉汙染₪╃☁▩,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜│╃。
  5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好│╃。不同批號的試劑不要混用│╃。保質前使用│╃。
  6. 底物B對光敏感₪╃☁▩,避免長時間暴露於光下│╃。

 

洗板方法

手工洗板方法•☁:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙₪╃☁▩,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內₪╃☁▩,浸泡1-2分鐘│╃。根據需要₪╃☁▩,重複此過程數次│╃。

自動洗板•☁:如果有自動洗板機₪╃☁▩,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求

  1. 不能檢測含NaN3的樣品₪╃☁▩,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性│╃。
  2. 標本採集後儘早進行提取₪╃☁▩,提取按相關文獻進行₪╃☁▩,提取後應儘快進行實驗│╃。若不能馬上進行試驗₪╃☁▩,可將標本放於-20℃儲存₪╃☁▩,但應避免反覆凍融│╃。

 

操作程式

  1.標準品的稀釋•☁:(本試劑盒提供原倍標準品一支₪╃☁▩,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋│╃。)

16 nmol/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

8 nmol/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

4 nmol/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

2 nmol/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

1 nmol/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  2.根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數│╃。每個標準品和空白孔建議做復孔│╃。每個樣品根據自己的數量來定₪╃☁▩,能使用復孔的儘量做復孔│╃。

  3.加樣•☁:1)空白孔₪╃☁▩,空白對照孔不加樣品₪╃☁▩,生物素標記的抗MDA抗體₪╃☁▩,鏈黴親和素-HRP₪╃☁▩,只加顯色劑A&B和終止液₪╃☁▩,其餘各步操作相同;2)標準品孔•☁:加入標準品50ul₪╃☁▩,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體₪╃☁▩,故不加);3)代測樣品孔•☁:加入樣本40ul₪╃☁▩,然後各加入抗MDA抗體10ul◕│••▩、鏈黴親和素-HRP50ul₪╃☁▩,蓋上封板膜₪╃☁▩,輕輕震盪混勻₪╃☁▩,37℃溫育60分鐘│╃。

  4.配液•☁:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用│╃。

  5.洗滌•☁:小心揭掉封板膜₪╃☁▩,棄去液體₪╃☁▩,甩幹₪╃☁▩,每孔加滿洗滌液₪╃☁▩,靜置30秒後去₪╃☁▩,如此重複5次₪╃☁▩,拍幹│╃。

  6.顯色•☁:每孔先加入顯色劑A50ul₪╃☁▩,再加入顯色劑B50μl₪╃☁▩,輕輕震盪混勻₪╃☁▩,37℃避光顯色15分鐘.

  7.終止•☁:每孔加終止液50μl₪╃☁▩,終止反應(此時藍色立轉黃色)│╃。

  8.測定•☁:以空白空調零₪╃☁▩,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)│╃。測定應在加終止液後10分鐘以內進行│╃。

  9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程₪╃☁▩,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度│╃。也可以使用各種應用軟體來計算│╃。

 

操作程式總結•☁:

 

檢測範圍•☁:0.8 nmol/L→16 nmol/L│╃。

 

儲存•☁:2-8℃│╃。

 

有效期•☁:6個月(2-8℃)│╃。

 
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