大鼠丙二醛(MDA)酶聯免疫檢測

                試劑盒使用說明書        

                                            AE90765Ra

   使用前仔細閱讀本說明書│╃。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理₪╃☁▩，來檢測大鼠丙二醛(MDA)₪╃☁▩，只能用於研究用途₪╃☁▩，不得用於醫學診斷│╃。

用  途•☁：用於大鼠血清◕│••▩、血漿及相關液體樣本中丙二醛(MDA)測定│╃。

工作原理:

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠丙二醛(MDA)水平│╃。向預先包被了丙二醛(MDA)單克隆抗體的酶標孔中加入丙二醛(MDA)₪╃☁▩，溫育；溫育後₪╃☁▩，加入生物素標記的抗丙二醛(MDA)抗體│╃。再與鏈黴親和素-HRP結合₪╃☁▩，形成免疫複合物₪╃☁▩，再經過溫育和洗滌₪╃☁▩，去除未結合的酶₪╃☁▩，然後加入底物A◕│••▩、B₪╃☁▩，產生藍色₪╃☁▩，並在酸的作用下轉化成終的黃色│╃。顏色的深淺與樣品中丙二醛(MDA)的濃度呈正相關│╃。

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1. 37℃恆溫箱│╃。
2. 標準規格酶標儀│╃。
3. 精密移液器及一次性吸頭
4. 蒸餾水₪╃☁▩，
5. 一次性試管
6. 吸水紙

注意事項

1. 從2-8℃取出的試劑盒₪╃☁▩，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘│╃。酶標包被板開封后如未用完₪╃☁▩，板條應裝入密封袋中儲存│╃。
2. 各步加樣均應使用加樣器₪╃☁▩，並經常校對其準確性₪╃☁▩，以避免試驗誤差
3. 嚴格按照說明書的操作進行₪╃☁▩，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
4. 為避免交叉汙染₪╃☁▩，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜│╃。
5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好│╃。不同批號的試劑不要混用│╃。保質前使用│╃。
6. 底物B對光敏感₪╃☁▩，避免長時間暴露於光下│╃。

洗板方法

手工洗板方法•☁：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙₪╃☁▩，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內₪╃☁▩，浸泡1-2分鐘│╃。根據需要₪╃☁▩，重複此過程數次│╃。

自動洗板•☁：如果有自動洗板機₪╃☁▩，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求

1. 不能檢測含NaN3的樣品₪╃☁▩，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性│╃。
2. 標本採集後儘早進行提取₪╃☁▩，提取按相關文獻進行₪╃☁▩，提取後應儘快進行實驗│╃。若不能馬上進行試驗₪╃☁▩，可將標本放於-20℃儲存₪╃☁▩，但應避免反覆凍融│╃。

操作程式

  1.標準品的稀釋•☁：(本試劑盒提供原倍標準品一支₪╃☁▩，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋│╃。)

  2.根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數│╃。每個標準品和空白孔建議做復孔│╃。每個樣品根據自己的數量來定₪╃☁▩，能使用復孔的儘量做復孔│╃。

  3.加樣•☁：1）空白孔₪╃☁▩，空白對照孔不加樣品₪╃☁▩，生物素標記的抗MDA抗體₪╃☁▩，鏈黴親和素-HRP₪╃☁▩，只加顯色劑A&B和終止液₪╃☁▩，其餘各步操作相同；2）標準品孔•☁：加入標準品50ul₪╃☁▩，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體₪╃☁▩，故不加)；3）代測樣品孔•☁：加入樣本40ul₪╃☁▩，然後各加入抗MDA抗體10ul◕│••▩、鏈黴親和素-HRP50ul₪╃☁▩，蓋上封板膜₪╃☁▩，輕輕震盪混勻₪╃☁▩，37℃溫育60分鐘│╃。

  4.配液•☁：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用│╃。

  5.洗滌•☁：小心揭掉封板膜₪╃☁▩，棄去液體₪╃☁▩，甩幹₪╃☁▩，每孔加滿洗滌液₪╃☁▩，靜置30秒後去₪╃☁▩，如此重複5次₪╃☁▩，拍幹│╃。

  6.顯色•☁：每孔先加入顯色劑A50ul₪╃☁▩，再加入顯色劑B50μl₪╃☁▩，輕輕震盪混勻₪╃☁▩，37℃避光顯色15分鐘.

  7.終止•☁：每孔加終止液50μl₪╃☁▩，終止反應（此時藍色立轉黃色）│╃。

  8.測定•☁：以空白空調零₪╃☁▩，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）│╃。測定應在加終止液後10分鐘以內進行│╃。

  9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程₪╃☁▩，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度│╃。也可以使用各種應用軟體來計算│╃。

操作程式總結•☁：

檢測範圍•☁：0.8 nmol/L→16 nmol/L│╃。

儲存•☁：2-8℃│╃。

有效期•☁：6個月(2-8℃)│╃。