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大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書

點選次數↟│☁₪↟:682 釋出時間↟│☁₪↟:2019/6/6
提 供 商↟│☁₪↟: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小↟│☁₪↟:
圖片型別↟│☁₪↟: 下載次數↟│☁₪↟: 127
資料型別↟│☁₪↟: DOC 瀏覽次數↟│☁₪↟: 682
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詳細介紹↟│☁₪↟: 檔案下載    

大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)酶聯免疫檢測  

     試劑盒使用說明書            AE91352TRa

使用前仔細閱讀本說明書✘↟✘。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理·•₪·,來檢測大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)·•₪·,只能用於研究用途·•₪·,不得用於醫學診斷✘↟✘。

用    途↟│☁₪↟:用於大鼠血清◕☁▩、血漿及相關液體樣本中α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)測定✘↟✘。

工作原理

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)水平✘↟✘。向預先包被了大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)·•₪·,溫育;溫育後·•₪·,加入生物素標記的抗E抗體✘↟✘。再與鏈黴親和素-HRP結合·•₪·,形成免疫複合物·•₪·,再經過溫育和洗滌·•₪·,去除未結合的酶·•₪·,然後加入底物A◕☁▩、B·•₪·,產生藍色·•₪·,並在酸的作用下轉化成終的黃色✘↟✘。顏色的深淺與樣品中大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的濃度呈正相關✘↟✘。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品3200pg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗E抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材

  1. 37℃恆溫箱✘↟✘。
  2. 標準規格酶標儀✘↟✘。
  3. 精密移液器及一次性吸頭
  4. 蒸餾水·•₪·,
  5. 一次性試管
  6. 吸水紙

 

注意事項

  1. 從2-8℃取出的試劑盒·•₪·,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘✘↟✘。酶標包被板開封后如未用完·•₪·,板條應裝入密封袋中儲存✘↟✘。
  2. 各步加樣均應使用加樣器·•₪·,並經常校對其準確性·•₪·,以避免試驗誤差
  3. 嚴格按照說明書的操作進行·•₪·,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  4. 為避免交叉汙染·•₪·,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜✘↟✘。
  5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好✘↟✘。不同批號的試劑不要混用✘↟✘。保質前使用✘↟✘。
  6. 底物B對光敏感·•₪·,避免長時間暴露於光下✘↟✘。

 

洗板方法

手工洗板方法↟│☁₪↟:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙·•₪·,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內·•₪·,浸泡1-2分鐘✘↟✘。根據需要·•₪·,重複此過程數次✘↟✘。

 

自動洗板↟│☁₪↟:如果有自動洗板機·•₪·,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求

1不能檢測含NaN3的樣品·•₪·,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性✘↟✘。

2.標本採集後儘早進行提取·•₪·,提取按相關文獻進行·•₪·,提取後應儘快進行實驗✘↟✘。若不能馬上進行試驗·•₪·,可將標本放於-20℃儲存·•₪·,但應避免反覆凍融✘↟✘。

操作程式

  1. 標準品的稀釋↟│☁₪↟:(本試劑盒提供原倍標準品一支·•₪·,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋✘↟✘。)

1600pg/ml

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

800pg/ml

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

400pg/ml

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

200pg/ml

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

100pg/ml

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

 2.根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數✘↟✘。每個標準品和空白孔建議做復孔✘↟✘。每個樣品根據自己的數量來定·•₪·,能使用復孔的儘量做復孔✘↟✘。

 3.加樣↟│☁₪↟:1)空白孔·•₪·,空白對照孔不加樣品·•₪·,生物素標記的抗α-SMA抗體·•₪·,鏈黴親和素-HRP·•₪·,只加顯色劑A&B和終止液·•₪·,其餘各步操作相同;2)標準品孔↟│☁₪↟:加入標準品50ul·•₪·,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體·•₪·,故不加);3)代測樣品孔↟│☁₪↟:加入樣本40ul·•₪·,然後各加入抗α-SMA抗體10ul◕☁▩、鏈黴親和素-HRP50ul·•₪·,蓋上封板膜·•₪·,輕輕震盪混勻·•₪·,37℃溫育60分鐘✘↟✘。

 4.配液↟│☁₪↟:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用✘↟✘。

 5.洗滌↟│☁₪↟:小心揭掉封板膜·•₪·,棄去液體·•₪·,甩幹·•₪·,每孔加滿洗滌液·•₪·,靜置30秒後棄去·•₪·,如此重複5次·•₪·,拍幹✘↟✘。

 6.顯色↟│☁₪↟:每孔先加入顯色劑A50ul·•₪·,再加入顯色劑B50μl·•₪·,輕輕震盪混勻·•₪·,37℃避光顯色15分鐘.

 7.終止↟│☁₪↟:每孔加終止液50μl·•₪·,終止反應(此時藍色立轉黃色)✘↟✘。

 8.測定↟│☁₪↟:以空白空調零·•₪·,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)✘↟✘。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行✘↟✘。

 9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程·•₪·,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度✘↟✘。也可以使用各種應用軟體來計算✘↟✘。

 

操作程式總結↟│☁₪↟:

 

試劑盒效能↟│☁₪↟:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上✘↟✘。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍↟│☁₪↟:

檢測範圍↟│☁₪↟:20pg/ml1600pg/ml✘↟✘。

 

儲存條件及有效期↟│☁₪↟:

 

儲存↟│☁₪↟:2-8℃✘↟✘。

有效期↟│☁₪↟:6個月(2-8℃)

 
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