大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA）酶聯免疫檢測 試劑盒使用說明書 AE91352TRa 使用前仔細閱讀本說明書✘↟✘。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理·•₪·，來檢測大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA）·•₪·，只能用於研究用途·•₪·，不得用於醫學診斷✘↟✘。 用 途↟│☁₪↟：用於大鼠血清◕☁▩、血漿及相關液體樣本中α平滑肌肌動蛋白(α-SMA）測定✘↟✘。 工作原理 本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA）水平✘↟✘。向預先包被了大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA）單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA）·•₪·，溫育；溫育後·•₪·，加入生物素標記的抗E抗體✘↟✘。再與鏈黴親和素-HRP結合·•₪·，形成免疫複合物·•₪·，再經過溫育和洗滌·•₪·，去除未結合的酶·•₪·，然後加入底物A◕☁▩、B·•₪·，產生藍色·•₪·，並在酸的作用下轉化成終的黃色✘↟✘。顏色的深淺與樣品中大鼠α平滑肌肌動蛋白(α-SMA）的濃度呈正相關✘↟✘。 試劑盒組成 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 儲存 | 說明書 | 1份 | 1份 | | 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | | 密封袋 | 1個 | 1個 | | 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃儲存 | 標準品3200pg/ml | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 標準品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 鏈黴親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 生物素標記的抗E抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃儲存 |
需要而未提供的試劑和器材 - 37℃恆溫箱✘↟✘。
- 標準規格酶標儀✘↟✘。
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水·•₪·，
- 一次性試管
- 吸水紙
注意事項 - 從2-8℃取出的試劑盒·•₪·，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘✘↟✘。酶標包被板開封后如未用完·•₪·，板條應裝入密封袋中儲存✘↟✘。
- 各步加樣均應使用加樣器·•₪·，並經常校對其準確性·•₪·，以避免試驗誤差
- 嚴格按照說明書的操作進行·•₪·，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
- 為避免交叉汙染·•₪·，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜✘↟✘。
- 不用的其它試劑應包裝好或蓋好✘↟✘。不同批號的試劑不要混用✘↟✘。保質前使用✘↟✘。
- 底物B對光敏感·•₪·，避免長時間暴露於光下✘↟✘。
洗板方法 手工洗板方法↟│☁₪↟：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙·•₪·，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內·•₪·，浸泡1-2分鐘✘↟✘。根據需要·•₪·，重複此過程數次✘↟✘。 自動洗板↟│☁₪↟：如果有自動洗板機·•₪·，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中 標本要求 1．不能檢測含NaN3的樣品·•₪·，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性✘↟✘。 2．標本採集後儘早進行提取·•₪·，提取按相關文獻進行·•₪·，提取後應儘快進行實驗✘↟✘。若不能馬上進行試驗·•₪·，可將標本放於-20℃儲存·•₪·，但應避免反覆凍融✘↟✘。 操作程式 - 標準品的稀釋↟│☁₪↟：(本試劑盒提供原倍標準品一支·•₪·，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋✘↟✘。)
1600pg/ml | 5號標準品 | 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液 | 800pg/ml | 4號標準品 | 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 400pg/ml | 3號標準品 | 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 200pg/ml | 2號標準品 | 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 100pg/ml | 1號標準品 | 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
2.根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數✘↟✘。每個標準品和空白孔建議做復孔✘↟✘。每個樣品根據自己的數量來定·•₪·，能使用復孔的儘量做復孔✘↟✘。 3.加樣↟│☁₪↟：1）空白孔·•₪·，空白對照孔不加樣品·•₪·，生物素標記的抗α-SMA抗體·•₪·，鏈黴親和素-HRP·•₪·，只加顯色劑A&B和終止液·•₪·，其餘各步操作相同；2）標準品孔↟│☁₪↟：加入標準品50ul·•₪·，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體·•₪·，故不加)；3）代測樣品孔↟│☁₪↟：加入樣本40ul·•₪·，然後各加入抗α-SMA抗體10ul◕☁▩、鏈黴親和素-HRP50ul·•₪·，蓋上封板膜·•₪·，輕輕震盪混勻·•₪·，37℃溫育60分鐘✘↟✘。 4.配液↟│☁₪↟：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用✘↟✘。 5.洗滌↟│☁₪↟：小心揭掉封板膜·•₪·，棄去液體·•₪·，甩幹·•₪·，每孔加滿洗滌液·•₪·，靜置30秒後棄去·•₪·，如此重複5次·•₪·，拍幹✘↟✘。 6.顯色↟│☁₪↟：每孔先加入顯色劑A50ul·•₪·，再加入顯色劑B50μl·•₪·，輕輕震盪混勻·•₪·，37℃避光顯色15分鐘. 7.終止↟│☁₪↟：每孔加終止液50μl·•₪·，終止反應（此時藍色立轉黃色）✘↟✘。 8.測定↟│☁₪↟：以空白空調零·•₪·，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）✘↟✘。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行✘↟✘。 9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程·•₪·，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度✘↟✘。也可以使用各種應用軟體來計算✘↟✘。 操作程式總結↟│☁₪↟： 
試劑盒效能↟│☁₪↟： 1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上✘↟✘。 2.批內與批間應分別小於9%和15% 檢測範圍↟│☁₪↟： 檢測範圍↟│☁₪↟：20pg/ml→1600pg/ml✘↟✘。 儲存條件及有效期↟│☁₪↟： 儲存↟│☁₪↟：2-8℃✘↟✘。 有效期↟│☁₪↟：6個月(2-8℃) |
