大鼠Smoothened蛋白（SMO）酶聯免疫

       檢測試劑盒使用說明書                                   AE91786Ra

使用前仔細閱讀本說明書☁╃╃。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理│₪，來檢測大鼠Smoothened蛋白（SMO）│₪，只能用於研究用途│₪，不得用於醫學診斷☁╃╃。

用 途•▩：用於大鼠血清╃▩₪╃、血漿及相關液體樣本中Smoothened蛋白（SMO）測定☁╃╃。

工作原理

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠Smoothened蛋白（SMO）水平☁╃╃。向預先包被了大鼠Smoothened蛋白（SMO）單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠Smoothened蛋白（SMO）│₪，溫育；溫育後│₪，加入生物素標記的抗SMO抗體☁╃╃。再與鏈黴親和素-HRP結合│₪，形成免疫複合物│₪，再經過溫育和洗滌│₪，去除未結合的酶│₪，然後加入底物A╃▩₪╃、B│₪，產生藍色│₪，並在酸的作用下轉化成終的黃色☁╃╃。顏色的深淺與樣品中大鼠Smoothened蛋白（SMO）的濃度呈正相關☁╃╃。

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1. 37℃恆溫箱☁╃╃。
2. 標準規格酶標儀☁╃╃。
3. 精密移液器及一次性吸頭
4. 蒸餾水│₪，
5. 一次性試管
6. 吸水紙

注意事項

1. 從2-8℃取出的試劑盒│₪，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘☁╃╃。酶標包被板開封后如未用完│₪，板條應裝入密封袋中儲存☁╃╃。
2. 各步加樣均應使用加樣器│₪，並經常校對其準確性│₪，以避免試驗誤差
3. 嚴格按照說明書的操作進行│₪，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
4. 為避免交叉汙染│₪，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜☁╃╃。
5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好☁╃╃。不同批號的試劑不要混用☁╃╃。保質前使用☁╃╃。
6. 底物B對光敏感│₪，避免長時間暴露於光下☁╃╃。

洗板方法

手工洗板方法•▩：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙│₪，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內│₪，浸泡1-2分鐘☁╃╃。根據需要│₪，重複此過程數次☁╃╃。

自動洗板•▩：如果有自動洗板機│₪，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品│₪，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性☁╃╃。

2．標本採集後儘早進行提取│₪，提取按相關文獻進行│₪，提取後應儘快進行實驗☁╃╃。若不能馬上進行試驗│₪，可將標本放於-20℃儲存│₪，但應避免反覆凍融☁╃╃。

操作程式

1. 標準品的稀釋•▩：(本試劑盒提供原倍標準品一支│₪，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋☁╃╃。)

  2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數☁╃╃。每個標準品和空白孔建議做復孔☁╃╃。每個樣品根據自己的數量來定│₪，能使用復孔的儘量做復孔☁╃╃。

  3.加樣•▩：1）空白孔│₪，空白對照孔不加樣品│₪，生物素標記的抗SMO抗體│₪，鏈黴親和素-HRP│₪，只加顯色劑A&B和終止液│₪，其餘各步操作相同；2）標準品孔•▩：加入標準品50ul│₪，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體│₪，故不加)；3）待測樣品孔•▩：加入樣本40ul│₪，然後各加入抗SMO抗體10ul╃▩₪╃、鏈黴親和素-HRP50ul│₪，蓋上封板膜│₪，輕輕震盪混勻│₪，37℃溫育60分鐘☁╃╃。

  4.配液•▩：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用☁╃╃。

  5.洗滌•▩：小心揭掉封板膜│₪，棄去液體│₪，甩幹│₪，每孔加滿洗滌液│₪，靜置30秒後棄去│₪，如此重複5次│₪，拍幹☁╃╃。

  6.顯色•▩：每孔先加入顯色劑A50ul│₪，再加入顯色劑B50μl│₪，輕輕震盪混勻│₪，37℃避光顯色15分鐘.

  7.終止•▩：每孔加終止液50μl│₪，終止反應（此時藍色立轉黃色）☁╃╃。

  8.測定•▩：以空白空調零│₪，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）☁╃╃。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行☁╃╃。

  9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程│₪，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度☁╃╃。也可以使用各種應用軟體來計算☁╃╃。

操作程式總結•▩：

試劑盒效能•▩：

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上☁╃╃。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

檢測範圍•▩：

檢測範圍•▩：60ng/L-2000ng/L

儲存條件及有效期•▩：

儲存•▩：2-8℃☁╃╃。

有效期•▩：6個月(2-8℃)☁╃╃。