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大鼠dickkopf(DKK1)酶聯免疫檢測

點選次數◕↟☁:590 釋出時間◕↟☁:2019/5/10
提 供 商◕↟☁: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小◕↟☁:
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大鼠dickkopf(DKK1)酶聯免疫

      檢測試劑盒使用說明書         AE91909Ra

使用前仔細閱讀本說明書☁☁·▩。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理₪╃▩₪·,來檢測大鼠dickkopf(DKK1)₪╃▩₪·,只能用於研究用途₪╃▩₪·,不得用於醫學診斷☁☁·▩。

  ◕↟☁:用於大鼠血清₪◕·₪、血漿及相關液體樣本中dickkopf(DKK1)測定☁☁·▩。

工作原理:

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠dickkopf(DKK1)水平☁☁·▩。向預先包被了大鼠dickkopf(DKK1)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠dickkopf(DKK1)₪╃▩₪·,溫育;溫育後₪╃▩₪·,加入生物素標記的抗DKK1抗體☁☁·▩。再與鏈黴親和素-HRP結合₪╃▩₪·,形成免疫複合物₪╃▩₪·,再經過溫育和洗滌₪╃▩₪·,去除未結合的酶₪╃▩₪·,然後加入底物A₪◕·₪、B₪╃▩₪·,產生藍色₪╃▩₪·,並在酸的作用下轉化成終的黃色☁☁·▩。顏色的深淺與樣品中大鼠dickkopf(DKK1)的濃度呈正相關☁☁·▩。

 

試劑盒組成: 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品24μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗DKK1抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材:

  • 37恆溫箱☁☁·▩。
  • 標準規格酶標儀☁☁·▩。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水₪╃▩₪·,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項:

  • 從2-8℃取出的試劑盒₪╃▩₪·,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘☁☁·▩。酶標包被板開封后如未用完₪╃▩₪·,板條應裝入密封袋中儲存☁☁·▩。
  • 各步加樣均應使用加樣器₪╃▩₪·,並經常校對其準確性₪╃▩₪·,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行₪╃▩₪·,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染₪╃▩₪·,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜☁☁·▩。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好☁☁·▩。不同批號的試劑不要混用☁☁·▩。保質前使用☁☁·▩。
  • 底物B對光敏感₪╃▩₪·,避免長時間暴露於光下☁☁·▩。

 

洗板方法:

手工洗板方法◕↟☁:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙₪╃▩₪·,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內₪╃▩₪·,浸泡1-2分鐘☁☁·▩。根據需要₪╃▩₪·,重複此過程數次☁☁·▩。

自動洗板◕↟☁:如果有自動洗板機₪╃▩₪·,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求: 

1.不能檢測含NaN3的樣品₪╃▩₪·,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性☁☁·▩。

2.標本採集後儘早進行提取₪╃▩₪·,提取按相關文獻進行₪╃▩₪·,提取後應儘快進行實驗☁☁·▩。若不能馬上進行試驗₪╃▩₪·,可將標本放於-20℃儲存₪╃▩₪·,但避免反覆凍融☁☁·▩。

 

操作程式:

  • 標準品的稀釋◕↟☁:(本試劑盒提供原倍標準品一支₪╃▩₪·,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋☁☁·▩。)

12μg/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

6μg/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

3μg/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

1.5μg/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

0.75μg/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數☁☁·▩。每個標準品和空 白孔建議做復孔☁☁·▩。每個樣品根據自己的數量來定₪╃▩₪·,能使用復孔的儘量做復孔☁☁·▩。
  • 加樣◕↟☁:1)空白孔₪╃▩₪·,空白對照孔不加樣品₪╃▩₪·,生物素標記的抗DKK1抗體₪╃▩₪·,鏈黴親和素-HRP₪╃▩₪·,只加顯色劑A&B和終止液₪╃▩₪·,其餘各步操作相同;2)標準品孔◕↟☁:加入標準品50ul₪╃▩₪·,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體₪╃▩₪·,故不加);3)代測樣品孔◕↟☁:加入樣本40ul₪╃▩₪·,然後各加入抗DKK1抗體10ul₪◕·₪、鏈黴親和素-HRP50ul₪╃▩₪·,蓋上封板膜₪╃▩₪·,輕輕震盪混勻₪╃▩₪·,37℃溫育60分鐘☁☁·▩。 
  • 配液◕↟☁:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用☁☁·▩。
  • 洗滌◕↟☁:小心揭掉封板膜₪╃▩₪·,棄去液體₪╃▩₪·,甩幹₪╃▩₪·,每孔加滿洗滌液₪╃▩₪·,靜置30秒後棄去₪╃▩₪·,如此重複5次₪╃▩₪·,拍幹☁☁·▩。
  • 顯色◕↟☁:每孔先加入顯色劑A50ul₪╃▩₪·,再加入顯色劑B50μl₪╃▩₪·,輕輕震盪混勻₪╃▩₪·,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止◕↟☁:每孔加終止液50μl₪╃▩₪·,終止反應(此時藍色立轉黃色)☁☁·▩。
  • 測定◕↟☁:以空白空調零₪╃▩₪·,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)☁☁·▩。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行☁☁·▩。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程₪╃▩₪·,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度☁☁·▩。也可以使用各種應用軟體來計算☁☁·▩。

 

操作程式總結◕↟☁:

 

試劑盒效能◕↟☁:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上☁☁·▩。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍◕↟☁:

檢測範圍◕↟☁:0.5μg/L -13μg/L

 

儲存條件及有效期◕↟☁:

儲存◕↟☁:2-8☁☁·▩。

有效期◕↟☁:6個月(2-8℃)☁☁·▩。

 
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