大鼠dickkopf（DKK1）酶聯免疫 檢測試劑盒使用說明書 AE91909Ra 使用前仔細閱讀本說明書☁☁·▩。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理₪╃▩₪·，來檢測大鼠dickkopf（DKK1）₪╃▩₪·，只能用於研究用途₪╃▩₪·，不得用於醫學診斷☁☁·▩。 用 途◕↟☁：用於大鼠血清₪◕·₪、血漿及相關液體樣本中dickkopf（DKK1）測定☁☁·▩。 工作原理: 本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠dickkopf（DKK1）水平☁☁·▩。向預先包被了大鼠dickkopf（DKK1）單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠dickkopf（DKK1）₪╃▩₪·，溫育；溫育後₪╃▩₪·，加入生物素標記的抗DKK1抗體☁☁·▩。再與鏈黴親和素-HRP結合₪╃▩₪·，形成免疫複合物₪╃▩₪·，再經過溫育和洗滌₪╃▩₪·，去除未結合的酶₪╃▩₪·，然後加入底物A₪◕·₪、B₪╃▩₪·，產生藍色₪╃▩₪·，並在酸的作用下轉化成終的黃色☁☁·▩。顏色的深淺與樣品中大鼠dickkopf（DKK1）的濃度呈正相關☁☁·▩。 試劑盒組成: 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 儲存 | 說明書 | 1份 | 1份 | | 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | | 密封袋 | 1個 | 1個 | | 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃儲存 | 標準品24μg/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 標準品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 鏈黴親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 生物素標記的抗DKK1抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃儲存 |
需要而未提供的試劑和器材: - 37℃恆溫箱☁☁·▩。
- 標準規格酶標儀☁☁·▩。
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水₪╃▩₪·，
- 一次性試管
- 吸水紙
注意事項: - 從2-8℃取出的試劑盒₪╃▩₪·，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘☁☁·▩。酶標包被板開封后如未用完₪╃▩₪·，板條應裝入密封袋中儲存☁☁·▩。
- 各步加樣均應使用加樣器₪╃▩₪·，並經常校對其準確性₪╃▩₪·，以避免試驗誤差
- 嚴格按照說明書的操作進行₪╃▩₪·，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
- 為避免交叉汙染₪╃▩₪·，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜☁☁·▩。
- 不用的其它試劑應包裝好或蓋好☁☁·▩。不同批號的試劑不要混用☁☁·▩。保質前使用☁☁·▩。
- 底物B對光敏感₪╃▩₪·，避免長時間暴露於光下☁☁·▩。
洗板方法: 手工洗板方法◕↟☁：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙₪╃▩₪·，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內₪╃▩₪·，浸泡1-2分鐘☁☁·▩。根據需要₪╃▩₪·，重複此過程數次☁☁·▩。 自動洗板◕↟☁：如果有自動洗板機₪╃▩₪·，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中 標本要求: 1．不能檢測含NaN3的樣品₪╃▩₪·，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性☁☁·▩。 2．標本採集後儘早進行提取₪╃▩₪·，提取按相關文獻進行₪╃▩₪·，提取後應儘快進行實驗☁☁·▩。若不能馬上進行試驗₪╃▩₪·，可將標本放於-20℃儲存₪╃▩₪·，但應避免反覆凍融☁☁·▩。 操作程式: - 標準品的稀釋◕↟☁：(本試劑盒提供原倍標準品一支₪╃▩₪·，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋☁☁·▩。)
12μg/L | 5號標準品 | 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液 | 6μg/L | 4號標準品 | 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 3μg/L | 3號標準品 | 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 1.5μg/L | 2號標準品 | 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 0.75μg/L | 1號標準品 | 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
- 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數☁☁·▩。每個標準品和空 白孔建議做復孔☁☁·▩。每個樣品根據自己的數量來定₪╃▩₪·，能使用復孔的儘量做復孔☁☁·▩。
- 加樣◕↟☁：1）空白孔₪╃▩₪·，空白對照孔不加樣品₪╃▩₪·，生物素標記的抗DKK1抗體₪╃▩₪·，鏈黴親和素-HRP₪╃▩₪·，只加顯色劑A&B和終止液₪╃▩₪·，其餘各步操作相同；2）標準品孔◕↟☁：加入標準品50ul₪╃▩₪·，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體₪╃▩₪·，故不加)；3）代測樣品孔◕↟☁：加入樣本40ul₪╃▩₪·，然後各加入抗DKK1抗體10ul₪◕·₪、鏈黴親和素-HRP50ul₪╃▩₪·，蓋上封板膜₪╃▩₪·，輕輕震盪混勻₪╃▩₪·，37℃溫育60分鐘☁☁·▩。
- 配液◕↟☁：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用☁☁·▩。
- 洗滌◕↟☁：小心揭掉封板膜₪╃▩₪·，棄去液體₪╃▩₪·，甩幹₪╃▩₪·，每孔加滿洗滌液₪╃▩₪·，靜置30秒後棄去₪╃▩₪·，如此重複5次₪╃▩₪·，拍幹☁☁·▩。
- 顯色◕↟☁：每孔先加入顯色劑A50ul₪╃▩₪·，再加入顯色劑B50μl₪╃▩₪·，輕輕震盪混勻₪╃▩₪·，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止◕↟☁：每孔加終止液50μl₪╃▩₪·，終止反應（此時藍色立轉黃色）☁☁·▩。
- 測定◕↟☁：以空白空調零₪╃▩₪·，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）☁☁·▩。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行☁☁·▩。
- 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程₪╃▩₪·，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度☁☁·▩。也可以使用各種應用軟體來計算☁☁·▩。
操作程式總結◕↟☁： 
試劑盒效能◕↟☁： 1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上☁☁·▩。 2.批內與批間應分別小於9%和15% 檢測範圍◕↟☁： 檢測範圍◕↟☁：0.5μg/L -13μg/L 儲存條件及有效期◕↟☁： 儲存◕↟☁：2-8℃☁☁·▩。 有效期◕↟☁：6個月(2-8℃)☁☁·▩。 |
