大鼠C-反應蛋白(CRP)酶聯免疫

         檢測試劑盒使用說明書      AE90989Ra

使用前仔細閱讀本說明書╃•。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理☁☁，來檢測大鼠C-反應蛋白(CRP)☁☁，只能用於研究用途☁☁，不得用於醫學診斷╃•。

用   途·◕₪•：用於大鼠血清☁↟╃₪◕、血漿及相關液體樣本中C-反應蛋白(CRP)測定╃•。

工作原理·◕₪•：

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠C-反應蛋白(CRP)水平╃•。向預先包被了大鼠C-反應蛋白(CRP)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠C-反應蛋白(CRP)☁☁，溫育；溫育後☁☁，加入生物素標記的抗C-反應蛋白(CRP)抗體╃•。再與鏈黴親和素-HRP結合☁☁，形成免疫複合物☁☁，再經過溫育和洗滌☁☁，去除未結合的酶☁☁，然後加入底物A☁↟╃₪◕、B☁☁，產生藍色☁☁，並在酸的作用下轉化成終的黃色╃•。顏色的深淺與樣品中大鼠C-反應蛋白(CRP)的濃度呈正相關╃•。

試劑盒組成: 

需要而未提供的試劑和器材:

• 37℃恆溫箱╃•。
• 標準規格酶標儀╃•。
• 精密移液器及一次性吸頭
• 蒸餾水☁☁，
• 一次性試管
• 吸水紙

注意事項:

• 從2-8℃取出的試劑盒☁☁，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘╃•。酶標包被板開封后如未用完☁☁，板條應裝入密封袋中儲存╃•。
• 各步加樣均應使用加樣器☁☁，並經常校對其準確性☁☁，以避免試驗誤差
• 嚴格按照說明書的操作進行☁☁，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
• 為避免交叉汙染☁☁，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜╃•。
• 不用的其它試劑應包裝好或蓋好╃•。不同批號的試劑不要混用╃•。保質前使用╃•。
• 底物B對光敏感☁☁，避免長時間暴露於光下╃•。

洗板方法:

手工洗板方法·◕₪•：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙☁☁，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內☁☁，浸泡1-2分鐘╃•。根據需要☁☁，重複此過程數次╃•。

自動洗板·◕₪•：如果有自動洗板機☁☁，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

標本要求: 

1．不能檢測含NaN3的樣品☁☁，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性╃•。

2．標本採集後儘早進行提取☁☁，提取按相關文獻進行☁☁，提取後應儘快進行實驗╃•。若不能馬上進行試驗☁☁，可將標本放於-20℃儲存☁☁，但應避免反覆凍融╃•。

操作程式:

• 標準品的稀釋·◕₪•：(本試劑盒提供原倍標準品一支☁☁，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋╃•。)

• 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數╃•。每個標準品和空白孔建議做復孔╃•。每個樣品根據自己的數量來定☁☁，能使用復孔的儘量做復孔╃•。
• 加樣·◕₪•：1）空白孔☁☁，空白對照孔不加樣品☁☁，生物素標記的抗CRP抗體☁☁，鏈黴親和素-HRP☁☁，只加顯色劑A&B和終止液☁☁，其餘各步操作相同；2）標準品孔·◕₪•：加入標準品50ul☁☁，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體☁☁，故不加)；3）待測樣品孔·◕₪•：加入樣本40ul☁☁，然後各加入抗CRP抗體10ul☁↟╃₪◕、鏈黴親和素-HRP50ul☁☁，蓋上封板膜☁☁，輕輕震盪混勻☁☁，37℃溫育60分鐘╃•。
• 配液·◕₪•：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用╃•。
• 洗滌·◕₪•：小心揭掉封板膜☁☁，棄去液體☁☁，甩幹☁☁，每孔加滿洗滌液☁☁，靜置30秒後棄去☁☁，如此重複5次☁☁，拍幹╃•。
• 顯色·◕₪•：每孔先加入顯色劑A50ul☁☁，再加入顯色劑B50μl☁☁，輕輕震盪混勻☁☁，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止·◕₪•：每孔加終止液50μl☁☁，終止反應（此時藍色立轉黃色）╃•。
• 測定·◕₪•：以空白空調零☁☁，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）╃•。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行╃•。
• 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程☁☁，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度╃•。也可以使用各種應用軟體來計算╃•。

操作程式總結·◕₪•：

試劑盒效能·◕₪•：

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上╃•。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

檢測範圍·◕₪•：

檢測範圍·◕₪•：80μg/L -2400μg/L         

儲存條件及有效期·◕₪•：

儲存·◕₪•：2-8℃╃•。

有效期·◕₪•：6個月(2-8℃)╃•。