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大鼠C-反應蛋白(CRP)酶聯免疫 檢測

點選次數·◕₪•:616 釋出時間·◕₪•:2019/4/26
提 供 商·◕₪•: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小·◕₪•:
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大鼠C-反應蛋白(CRP)酶聯免疫

         檢測試劑盒使用說明書      AE90989Ra

使用前仔細閱讀本說明書╃•。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理☁☁,來檢測大鼠C-反應蛋白(CRP)☁☁,只能用於研究用途☁☁,不得用於醫學診斷╃•。

   ·◕₪•:用於大鼠血清☁↟╃₪◕、血漿及相關液體樣本中C-反應蛋白(CRP)測定╃•。

工作原理·◕₪•:

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠C-反應蛋白(CRP)水平╃•。向預先包被了大鼠C-反應蛋白(CRP)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠C-反應蛋白(CRP)☁☁,溫育;溫育後☁☁,加入生物素標記的抗C-反應蛋白(CRP)抗體╃•。再與鏈黴親和素-HRP結合☁☁,形成免疫複合物☁☁,再經過溫育和洗滌☁☁,去除未結合的酶☁☁,然後加入底物A☁↟╃₪◕、B☁☁,產生藍色☁☁,並在酸的作用下轉化成終的黃色╃•。顏色的深淺與樣品中大鼠C-反應蛋白(CRP)的濃度呈正相關╃•。

 

試劑盒組成: 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品4800μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗CRP抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

 

需要而未提供的試劑和器材:

  • 37恆溫箱╃•。
  • 標準規格酶標儀╃•。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水☁☁,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項:

  • 從2-8℃取出的試劑盒☁☁,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘╃•。酶標包被板開封后如未用完☁☁,板條應裝入密封袋中儲存╃•。
  • 各步加樣均應使用加樣器☁☁,並經常校對其準確性☁☁,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行☁☁,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染☁☁,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜╃•。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好╃•。不同批號的試劑不要混用╃•。保質前使用╃•。
  • 底物B對光敏感☁☁,避免長時間暴露於光下╃•。

 

洗板方法:

手工洗板方法·◕₪•:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙☁☁,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內☁☁,浸泡1-2分鐘╃•。根據需要☁☁,重複此過程數次╃•。

自動洗板·◕₪•:如果有自動洗板機☁☁,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求: 

1.不能檢測含NaN3的樣品☁☁,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性╃•。

2.標本採集後儘早進行提取☁☁,提取按相關文獻進行☁☁,提取後應儘快進行實驗╃•。若不能馬上進行試驗☁☁,可將標本放於-20℃儲存☁☁,但避免反覆凍融╃•。

 

操作程式:

  • 標準品的稀釋·◕₪•:(本試劑盒提供原倍標準品一支☁☁,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋╃•。)

2400μg/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

1200μg/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

600μg/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

300μg/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

150μg/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  • 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數╃•。每個標準品和空白孔建議做復孔╃•。每個樣品根據自己的數量來定☁☁,能使用復孔的儘量做復孔╃•。
  • 加樣·◕₪•:1)空白孔☁☁,空白對照孔不加樣品☁☁,生物素標記的抗CRP抗體☁☁,鏈黴親和素-HRP☁☁,只加顯色劑A&B和終止液☁☁,其餘各步操作相同;2)標準品孔·◕₪•:加入標準品50ul☁☁,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體☁☁,故不加);3)待測樣品孔·◕₪•:加入樣本40ul☁☁,然後各加入抗CRP抗體10ul☁↟╃₪◕、鏈黴親和素-HRP50ul☁☁,蓋上封板膜☁☁,輕輕震盪混勻☁☁,37℃溫育60分鐘╃•。
  • 配液·◕₪•:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用╃•。
  • 洗滌·◕₪•:小心揭掉封板膜☁☁,棄去液體☁☁,甩幹☁☁,每孔加滿洗滌液☁☁,靜置30秒後棄去☁☁,如此重複5次☁☁,拍幹╃•。
  • 顯色·◕₪•:每孔先加入顯色劑A50ul☁☁,再加入顯色劑B50μl☁☁,輕輕震盪混勻☁☁,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止·◕₪•:每孔加終止液50μl☁☁,終止反應(此時藍色立轉黃色)╃•。
  • 測定·◕₪•:以空白空調零☁☁,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)╃•。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行╃•。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程☁☁,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度╃•。也可以使用各種應用軟體來計算╃•。

 

操作程式總結·◕₪•:

試劑盒效能·◕₪•:

1.樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.92以上╃•。

2.批內與批間應分別小於9%和15%

 

檢測範圍·◕₪•:

檢測範圍·◕₪•:80μg/L -2400μg/L         

 

儲存條件及有效期·◕₪•:

儲存·◕₪•:2-8╃•。

有效期·◕₪•:6個月(2-8℃)╃•。

 
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