大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)酶聯免疫檢測 試劑盒使用說明書 AE98606G 使用前仔細閱讀本說明書·◕·◕✘。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理☁•╃，來檢測大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)☁•╃，只能用於研究用途☁•╃，不得用於醫學診斷·◕·◕✘。 用 途·₪╃：用於測定植物組織☁•╃，細胞及其它相關樣本中大豆11S伴球蛋白(11S- conglycinin)含量測定·◕·◕✘。 工作原理: 本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)水平·◕·◕✘。向預先包被了大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)單克隆抗體的酶標孔中加入大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)☁•╃，溫育；溫育後☁•╃，加入生物素標記的抗11S-conglycinin抗體·◕·◕✘。再與鏈黴親和素-HRP結合☁•╃，形成免疫複合物☁•╃，再經過溫育和洗滌☁•╃，去除未結合的酶☁•╃，然後加入底物A✘│◕✘、B☁•╃，產生藍色☁•╃，並在酸的作用下轉化成終的黃色·◕·◕✘。顏色的深淺與樣品中大豆11S伴球蛋白(11S-conglycinin)的濃度呈正相關·◕·◕✘。 試劑盒組成: 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 儲存 | 說明書 | 1份 | 1份 | | 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | | 密封袋 | 1個 | 1個 | | 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃儲存 | 標準品·₪╃：800 ng/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 標準品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 鏈黴親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 生物素標記的抗11S-conglycinin抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃儲存 |
需要而未提供的試劑和器材: - 37℃恆溫箱·◕·◕✘。
- 標準規格酶標儀·◕·◕✘。
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水☁•╃，
- 一次性試管
- 吸水紙
注意事項: - 從2-8℃取出的試劑盒☁•╃，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘·◕·◕✘。酶標包被板開封后如未用完☁•╃，板條應裝入密封袋中儲存·◕·◕✘。
- 各步加樣均應使用加樣器☁•╃，並經常校對其準確性☁•╃，以避免試驗誤差
- 嚴格按照說明書的操作進行☁•╃，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
- 為避免交叉汙染☁•╃，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜·◕·◕✘。
- 不用的其它試劑應包裝好或蓋好·◕·◕✘。不同批號的試劑不要混用·◕·◕✘。保質前使用·◕·◕✘。
- 底物B對光敏感☁•╃，避免長時間暴露於光下·◕·◕✘。
洗板方法: 手工洗板方法·₪╃：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙☁•╃，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內☁•╃，浸泡1-2分鐘·◕·◕✘。根據需要☁•╃，重複此過程數次·◕·◕✘。 自動洗板·₪╃：如果有自動洗板機☁•╃，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中 標本要求 : 1．不能檢測含NaN3的樣品☁•╃，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性·◕·◕✘。 2．標本採集後儘早進行提取☁•╃，提取按相關文獻進行☁•╃，提取後應儘快進行實驗·◕·◕✘。若不能馬上進行試驗☁•╃，可將標本放於-20℃儲存☁•╃，但應避免反覆凍融·◕·◕✘。 操作程式: - 標準品的稀釋·₪╃：(本試劑盒提供原倍標準品一支☁•╃，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋·◕·◕✘。)
400ng/L | 5號標準品 | 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液 | 200ng/L | 4號標準品 | 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 100ng/L | 3號標準品 | 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 50ng/L | 2號標準品 | 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 25ng/L | 1號標準品 | 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
- 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數·◕·◕✘。每個標準品和空白孔建議做復孔·◕·◕✘。每個樣品根據自己的數量來定☁•╃，能使用復孔的儘量做復孔·◕·◕✘。
- 加樣·₪╃：
- 1）空白孔☁•╃，空白對照孔不加樣品☁•╃，生物素標記的抗11S- conglycinin 抗體☁•╃，鏈黴親和素-HRP☁•╃，只加顯色劑A&B和終止液,其餘各步操作相 同；
- 2）標準品孔·₪╃：加入標準品50ul☁•╃，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已 事先整合好生物素抗體☁•╃，故不加)；
- 3）待測樣品孔·₪╃：加入樣本40ul☁•╃，然後各加入抗11S-conglycinin抗 體10ul✘│◕✘、鏈黴親和素-HRP50ul☁•╃，蓋上封板膜☁•╃，輕輕震盪混勻☁•╃， 37℃溫育60分鐘·◕·◕✘。
- 配液·₪╃：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用·◕·◕✘。
- 洗滌·₪╃：小心揭掉封板膜☁•╃，棄去液體☁•╃，甩幹☁•╃，每孔加滿洗滌液☁•╃，靜置30 秒後棄去☁•╃，如此重複5次☁•╃，拍幹·◕·◕✘。
- 顯色·₪╃：每孔先加入顯色劑A50ul☁•╃，再加入顯色劑B50μl☁•╃，輕輕震盪混 勻☁•╃，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止·₪╃：每孔加終止液50μl☁•╃，終止反應（此時藍色立轉黃色）·◕·◕✘。
- 測定·₪╃：以空白空調零☁•╃，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）·◕·◕✘。測定應在加終止液後10分鐘以內進行·◕·◕✘。
- 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程☁•╃，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度·◕·◕✘。也可以使用各種應用軟體來計算·◕·◕✘。
操作程式總結·₪╃： 檢測範圍·₪╃：15ng/L -400 ng/L 保 存·₪╃：2-8℃·◕·◕✘。 有效期·₪╃：6個月(2-8℃)·◕·◕✘。 |
