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膜聯蛋白A2A5抗體 (Anxab)酶聯免疫檢測

點選次數☁│↟↟·:1484 釋出時間☁│↟↟·:2019/4/12
提 供 商☁│↟↟·: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小☁│↟↟·:
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膜聯蛋白A2A5抗體 (Anxab)酶聯免疫檢測

         試劑盒使用說明書          AE91077Hu   

使用前仔細閱讀本說明書•│╃╃。酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理↟₪▩☁╃,來檢測人膜聯蛋白A2A5抗體 (Anxab)↟₪▩☁╃,只能用於研究用途↟₪▩☁╃,不得用於醫學診斷•│╃╃。

   ☁│↟↟·:用於人血清☁₪✘、血漿及相關液體樣本中膜聯蛋白A2A5抗體 (Anxab)        測定•│╃╃。

工作原理:

本試劑盒採用的生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法ELISA)測定樣品中人膜聯蛋白A2A5抗體 (Anxab)水平•│╃╃。向預先包被了膜聯蛋白A2A5抗體 (Anxab)克隆抗體的酶標孔中加入膜聯蛋白A2A5抗體 (Anxab)↟₪▩☁╃,溫育;溫育後↟₪▩☁╃,加入生物素標記的抗ANXAB抗體•│╃╃。再與鏈黴親和素-HRP結合↟₪▩☁╃,形成免疫複合物↟₪▩☁╃,再經過溫育和洗滌↟₪▩☁╃,去除未結合的酶↟₪▩☁╃,然後加入底物A☁₪✘、B↟₪▩☁╃,產生藍色↟₪▩☁╃,並在酸的作用下轉化成終的黃色•│╃╃。顏色的深淺與樣品中膜聯蛋白A2A5抗體 (Anxab)的濃度呈正相關•│╃╃。

 

試劑盒組成: 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品☁│↟↟·:200μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗ANXAB抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材:

  • 37恆溫箱•│╃╃。
  • 標準規格酶標儀•│╃╃。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水↟₪▩☁╃,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項:

  • 從2-8℃取出的試劑盒↟₪▩☁╃,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘•│╃╃。酶標包被板開封后如未用完↟₪▩☁╃,板條應裝入密封袋中儲存•│╃╃。
  • 各步加樣均應使用加樣器↟₪▩☁╃,並經常校對其準確性↟₪▩☁╃,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行↟₪▩☁╃,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  • 免交叉汙染↟₪▩☁╃,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜•│╃╃。
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好•│╃╃。不同批號的試劑不要混用•│╃╃。保質前使用•│╃╃。
  • 底物B對光敏感↟₪▩☁╃,避免長時間暴露於光下•│╃╃。

 

洗板方法:

手工洗板方法☁│↟↟·:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙↟₪▩☁╃,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內↟₪▩☁╃,浸泡1-2分鐘•│╃╃。根據需要↟₪▩☁╃,重複此過程數次•│╃╃。

自動洗板☁│↟↟·:如果有自動洗板機↟₪▩☁╃,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求: 

1.不能檢測含NaN3的樣品↟₪▩☁╃,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性•│╃╃。

2.標本採集後儘早進行提取↟₪▩☁╃,提取按相關文獻進行↟₪▩☁╃,提取後應儘快進行實驗•│╃╃。若不能馬上進行試驗↟₪▩☁╃,可將標本放於-20℃儲存↟₪▩☁╃,但避免反覆凍融•│╃╃。

 

操作程式

  • 標準品的稀釋☁│↟↟·:(本試劑盒提供原倍標準品一支↟₪▩☁╃,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋•│╃╃。)

100μg/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

50μg/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

25μg/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

12.5μg/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

6.25μg/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  • 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數•│╃╃。每個標準品和空白孔建議做復孔•│╃╃。每個樣品根據自己的數量來定↟₪▩☁╃,能使用復孔的儘量做復孔•│╃╃。
  • 加樣☁│↟↟·:1)空白孔↟₪▩☁╃,空白對照孔不加樣品↟₪▩☁╃,生物素標記的抗ANXAB抗體↟₪▩☁╃,鏈黴親和素-HRP↟₪▩☁╃,只加顯色劑A&B和終止液↟₪▩☁╃,其餘各步操作相同;2)標準品孔☁│↟↟·:加入標準品50ul↟₪▩☁╃,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體↟₪▩☁╃,故不加);3)代測樣品孔☁│↟↟·:加入樣本40ul↟₪▩☁╃,然後各加入抗ANXAB抗體10ul☁₪✘、鏈黴親和素-HRP50ul↟₪▩☁╃,蓋上封板膜↟₪▩☁╃,輕輕震盪混勻↟₪▩☁╃,37℃溫育60分鐘•│╃╃。
  • 配液☁│↟↟·:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用•│╃╃。
  • 洗滌☁│↟↟·:小心揭掉封板膜↟₪▩☁╃,棄去液體↟₪▩☁╃,甩幹↟₪▩☁╃,每孔加滿洗滌液↟₪▩☁╃,靜置30秒後棄去↟₪▩☁╃,如此重複5次↟₪▩☁╃,拍幹•│╃╃。
  • 顯色☁│↟↟·:每孔先加入顯色劑A50ul↟₪▩☁╃,再加入顯色劑B50μl↟₪▩☁╃,輕輕震盪混勻↟₪▩☁╃,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止☁│↟↟·:每孔加終止液50μl↟₪▩☁╃,終止反應(此時藍色立轉黃色)•│╃╃。
  • 測定☁│↟↟·:以空白空調零↟₪▩☁╃,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)•│╃╃。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行•│╃╃。
  • 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程↟₪▩☁╃,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度•│╃╃。也可以使用各種應用軟體來計算•│╃╃。

 

操作程式總結☁│↟↟·:

檢測範圍☁│↟↟·:3μg/L -120 μg/L

儲存☁│↟↟·:2-8•│╃╃。

有效期☁│↟↟·:6個月(2-8℃)•│╃╃。

 
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