人膜聯蛋白A2抗體（Anxa2 Ab）酶聯免疫檢測 試劑盒使用說明書 AE91118Hu 使用前仔細閱讀本說明書↟◕。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理╃│☁▩◕，來檢測人膜聯蛋白A2抗體（Anxa2 Ab）╃│☁▩◕，只能用於研究用途╃│☁▩◕，不得用於醫學診斷↟◕。 用 途✘▩↟☁│：用於人血清·↟▩、血漿及相關液體樣本中膜聯蛋白A2抗體（Anxa2 Ab） 測定↟◕。 工作原理✘▩↟☁│： 本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人膜聯蛋白A2抗體（Anxa2 Ab）水平↟◕。向預先包被了膜聯蛋白A2抗體（Anxa2 Ab）克隆抗體的酶標孔中加入膜聯蛋白A2抗體（Anxa2 Ab）╃│☁▩◕，溫育；溫育後╃│☁▩◕，加入生物素標記的抗ANXA2 AB抗體↟◕。再與鏈黴親和素-HRP結合╃│☁▩◕，形成免疫複合物╃│☁▩◕，再經過溫育和洗滌╃│☁▩◕，去除未結合的酶╃│☁▩◕，然後加入底物A·↟▩、B╃│☁▩◕，產生藍色╃│☁▩◕，並在酸的作用下轉化成終的黃色↟◕。顏色的深淺與樣品中膜聯蛋白A2抗體（Anxa2 Ab）的濃度呈正相關↟◕。 試劑盒組成 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 儲存 | 說明書 | 1份 | 1份 | | 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | | 密封袋 | 1個 | 1個 | | 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃儲存 | 標準品✘▩↟☁│：720μg/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 標準品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 鏈黴親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 生物素標記的抗ANXA2 AB抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃儲存 | 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃儲存 |
需要而未提供的試劑和器材✘▩↟☁│： - 37℃恆溫箱↟◕。
- 標準規格酶標儀↟◕。
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水╃│☁▩◕，
- 一次性試管
- 吸水紙
注意事項✘▩↟☁│： - 從2-8℃取出的試劑盒╃│☁▩◕，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘↟◕。酶標包被板開封后如未用完╃│☁▩◕，板條應裝入密封袋中儲存↟◕。
- 各步加樣均應使用加樣器╃│☁▩◕，並經常校對其準確性╃│☁▩◕，以避免試驗誤差
- 嚴格按照說明書的操作進行╃│☁▩◕，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
- 為避免交叉汙染╃│☁▩◕，要避免重複使用手中的吸頭和封板膜↟◕。
- 不用的其它試劑應包裝好或蓋好↟◕。不同批號的試劑不要混用↟◕。保質前使用↟◕。
- 底物B對光敏感╃│☁▩◕，避免長時間暴露於光下↟◕。
洗板方法✘▩↟☁│： 手工洗板方法✘▩↟☁│：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙╃│☁▩◕，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內╃│☁▩◕，浸泡1-2分鐘↟◕。根據需要╃│☁▩◕，重複此過程數次↟◕。 自動洗板✘▩↟☁│：如果有自動洗板機╃│☁▩◕，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中 標本要求✘▩↟☁│： 1．不能檢測含NaN3的樣品╃│☁▩◕，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性↟◕。 2．標本採集後儘早進行提取╃│☁▩◕，提取按相關文獻進行╃│☁▩◕，提取後應儘快進行實驗↟◕。若不能馬上進行試驗╃│☁▩◕，可將標本放於-20℃儲存╃│☁▩◕，但應避免反覆凍融↟◕。 操作程式✘▩↟☁│： - 標準品的稀釋✘▩↟☁│：(本試劑盒提供原倍標準品一支╃│☁▩◕，使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟◕。)
360μg/L | 5號標準品 | 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液 | 180μg/L | 4號標準品 | 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 90μg/L | 3號標準品 | 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 45μg/L | 2號標準品 | 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液 | 22.5μg/L | 1號標準品 | 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
- 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數↟◕。每個標準品和空白孔建議做復孔↟◕。每個樣品根據自己的數量來定╃│☁▩◕，能使用復孔的儘量做復孔↟◕。
- 加樣✘▩↟☁│：1）空白孔╃│☁▩◕，空白對照孔不加樣品╃│☁▩◕，生物素標記的抗ANXA2 AB抗體╃│☁▩◕，鏈黴親和素-HRP╃│☁▩◕，只加顯色劑A&B和終止液╃│☁▩◕，其餘各步操作相同；2）標準品孔✘▩↟☁│：加入標準品50ul╃│☁▩◕，鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體╃│☁▩◕，故不加)；3）代測樣品孔✘▩↟☁│：加入樣本40ul╃│☁▩◕，然後各加入抗ANXA2 AB抗體10ul·↟▩、鏈黴親和素-HRP50ul╃│☁▩◕，蓋上封板膜╃│☁▩◕，輕輕震盪混勻╃│☁▩◕，37℃溫育60分鐘↟◕。
- 配液✘▩↟☁│：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用↟◕。
- 洗滌✘▩↟☁│：小心揭掉封板膜╃│☁▩◕，棄去液體╃│☁▩◕，甩幹╃│☁▩◕，每孔加滿洗滌液╃│☁▩◕，靜置30秒後棄去╃│☁▩◕，如此重複5次╃│☁▩◕，拍幹↟◕。
- 顯色✘▩↟☁│：每孔先加入顯色劑A50ul╃│☁▩◕，再加入顯色劑B50μl╃│☁▩◕，輕輕震盪混勻╃│☁▩◕，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止✘▩↟☁│：每孔加終止液50μl╃│☁▩◕，終止反應（此時藍色立轉黃色）↟◕。
- 測定✘▩↟☁│：以空白空調零╃│☁▩◕，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）↟◕。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行↟◕。
- 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程╃│☁▩◕，再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度↟◕。也可以使用各種應用軟體來計算↟◕。
操作程式總結✘▩↟☁│： 
檢測範圍✘▩↟☁│：12μg/L -380μg/L 儲存✘▩↟☁│：2-8℃↟◕。 有效期✘▩↟☁│：6個月(2-8℃)↟◕。 |
