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人膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)酶聯免疫檢測

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提 供 商✘▩↟☁│: 上海聯碩生物科技有限公司 資料大小✘▩↟☁│:
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人膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)酶聯免疫檢測

          試劑盒使用說明書                                      AE91118Hu  

使用前仔細閱讀本說明書↟◕。本酶聯免疫試劑盒是基於雙抗體夾心技術原理╃│☁▩◕,來檢測人膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)╃│☁▩◕,只能用於研究用途╃│☁▩◕,不得用於醫學診斷↟◕。

用  途✘▩↟☁│:用於人血清·↟▩、血漿及相關液體樣本中膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)        測定↟◕。

工作原理✘▩↟☁│:

本試劑盒採用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)水平↟◕。向預先包被了膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)克隆抗體的酶標孔中加入膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)╃│☁▩◕,溫育;溫育後╃│☁▩◕,加入生物素標記的抗ANXA2 AB抗體↟◕。再與鏈黴親和素-HRP結合╃│☁▩◕,形成免疫複合物╃│☁▩◕,再經過溫育和洗滌╃│☁▩◕,去除未結合的酶╃│☁▩◕,然後加入底物A·↟▩、B╃│☁▩◕,產生藍色╃│☁▩◕,並在酸的作用下轉化成終的黃色↟◕。顏色的深淺與樣品中膜聯蛋白A2抗體(Anxa2 Ab)的濃度呈正相關↟◕。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

儲存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃儲存

標準品✘▩↟☁│:720μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃儲存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

鏈黴親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

生物素標記的抗ANXA2 AB抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃儲存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃儲存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃儲存

 

需要而未提供的試劑和器材✘▩↟☁│:

  1. 37℃恆溫箱↟◕。
  2. 標準規格酶標儀↟◕。
  3. 精密移液器及一次性吸頭
  4. 蒸餾水╃│☁▩◕,
  5. 一次性試管
  6. 吸水紙

 

注意事項✘▩↟☁│:

  1. 從2-8℃取出的試劑盒╃│☁▩◕,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘↟◕。酶標包被板開封后如未用完╃│☁▩◕,板條應裝入密封袋中儲存↟◕。
  2. 各步加樣均應使用加樣器╃│☁▩◕,並經常校對其準確性╃│☁▩◕,以避免試驗誤差
  3. 嚴格按照說明書的操作進行╃│☁▩◕,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  4. 為避免交叉汙染╃│☁▩◕,要避免重複使用手中的吸頭和封板膜↟◕。
  5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好↟◕。不同批號的試劑不要混用↟◕。保質前使用↟◕。
  6. 底物B對光敏感╃│☁▩◕,避免長時間暴露於光下↟◕。

 

洗板方法✘▩↟☁│:

手工洗板方法✘▩↟☁│:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙╃│☁▩◕,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內╃│☁▩◕,浸泡1-2分鐘↟◕。根據需要╃│☁▩◕,重複此過程數次↟◕。

自動洗板✘▩↟☁│:如果有自動洗板機╃│☁▩◕,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中

 

標本要求✘▩↟☁│:

1不能檢測含NaN3的樣品╃│☁▩◕,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性↟◕。

2.標本採集後儘早進行提取╃│☁▩◕,提取按相關文獻進行╃│☁▩◕,提取後應儘快進行實驗↟◕。若不能馬上進行試驗╃│☁▩◕,可將標本放於-20℃儲存╃│☁▩◕,但應避免反覆凍融↟◕。

 

操作程式✘▩↟☁│:

  1. 標準品的稀釋✘▩↟☁│:(本試劑盒提供原倍標準品一支╃│☁▩◕,使用者可按照下列圖表在小試管中進行稀釋↟◕。)

360μg/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

180μg/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

90μg/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

45μg/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

22.5μg/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 

  1. 根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數↟◕。每個標準品和空白孔建議做復孔↟◕。每個樣品根據自己的數量來定╃│☁▩◕,能使用復孔的儘量做復孔↟◕。
  2. 加樣✘▩↟☁│:1)空白孔╃│☁▩◕,空白對照孔不加樣品╃│☁▩◕,生物素標記的抗ANXA2 AB抗體╃│☁▩◕,鏈黴親和素-HRP╃│☁▩◕,只加顯色劑A&B和終止液╃│☁▩◕,其餘各步操作相同;2)標準品孔✘▩↟☁│:加入標準品50ul╃│☁▩◕,鏈黴親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體╃│☁▩◕,故不加);3)代測樣品孔✘▩↟☁│:加入樣本40ul╃│☁▩◕,然後各加入抗ANXA2 AB抗體10ul·↟▩、鏈黴親和素-HRP50ul╃│☁▩◕,蓋上封板膜╃│☁▩◕,輕輕震盪混勻╃│☁▩◕,37℃溫育60分鐘↟◕。
  3. 配液✘▩↟☁│:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用↟◕。
  4. 洗滌✘▩↟☁│:小心揭掉封板膜╃│☁▩◕,棄去液體╃│☁▩◕,甩幹╃│☁▩◕,每孔加滿洗滌液╃│☁▩◕,靜置30秒後棄去╃│☁▩◕,如此重複5次╃│☁▩◕,拍幹↟◕。
  5. 顯色✘▩↟☁│:每孔先加入顯色劑A50ul╃│☁▩◕,再加入顯色劑B50μl╃│☁▩◕,輕輕震盪混勻╃│☁▩◕,37℃避光顯色15分鐘.
  6. 終止✘▩↟☁│:每孔加終止液50μl╃│☁▩◕,終止反應(此時藍色立轉黃色)↟◕。
  7. 測定✘▩↟☁│:以空白空調零╃│☁▩◕,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)↟◕。 測定應在加終止液後10分鐘以內進行↟◕。
  8. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線迴歸方程╃│☁▩◕,再根據樣品的OD值在迴歸方程上計算出對應的樣品濃度↟◕。也可以使用各種應用軟體來計算↟◕。

 

操作程式總結✘▩↟☁│:

檢測範圍✘▩↟☁│:12μg/L -380μg/L

 

儲存✘▩↟☁│:2-8℃↟◕。

有效期✘▩↟☁│:6個月(2-8℃)↟◕。

 
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