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怎樣提取及分離純化金屬硫蛋白
  • 釋出日期₪│◕·:2022-11-18      瀏覽次數₪│◕·:133
    • 金屬硫蛋白(metallothionein│◕↟,MT)是一類廣泛存在於生物中的低分子質量(6 ~ 7 kD)│╃、無芳香族氨基酸│╃、富含金屬與半胱氨酸( Cys 20 %〜30 % )的生物學特性的金屬結合蛋白╃◕☁。1957年│◕↟,美國科學家Margoshes和Vallee最早從馬腎中分離得到金屬硫蛋白│◕↟,繼1975年Prinz從釀酒酵母中分離得到Cu- MT後│◕↟,1977年科學家又從大豆的根中分離出富含Cd2+的類金屬硫蛋白╃◕☁。

      金屬硫蛋白中大量巰基賦予了其螯合重金屬離子功能及重金屬解毒作用│◕↟,同時MT清除自由基的能力明顯強於超氧化物歧化酶和谷胱甘肽│◕↟,並調節生物體內微量元素濃度│◕↟,調節細胞代謝│╃、增殖分化│◕↟,在食品│╃、醫藥│╃、保健│╃、環境│╃、化妝品│╃、生物工程等領域中應用廣泛╃◕☁。近年來│◕↟,M T由於它的生物學功能│◕↟,逐漸受到重視併成為研究的熱點╃◕☁。

      1. 金屬硫蛋白的提取技術

      關於M T的結構與功能的研究是當今化學│╃、生物學和臨床醫學等領域的重要課題之一│◕↟,隨著研究工作的不斷深人│◕↟,對M T的用量和純度的要求越來越高╃◕☁。勻漿離心法是提取海洋生物中MT最常採用的方法│◕↟,提取劑選擇性質穩定且與生理體液相容性好的Tris- HCl(簡稱Tris)緩衝溶液╃◕☁。不同濃度│╃、p H 的提取液│◕↟,以及樣本與緩衝液的質量體積比│╃、勻漿液離心轉速大小│◕↟,時間長短│◕↟,都會對MT的提取率產生影響╃◕☁。因此│◕↟,不同的方法│◕↟,提取的MT含量和純度等也不盡相同╃◕☁。

      2.  金屬硫蛋白的分離純化技術

      為深人研究金屬硫蛋白結構和功能特性及其相關性│◕↟,需要對金屬硫蛋白提取液進行濃縮處理╃◕☁。在蛋白的純化過程中│◕↟,一次性處理較多樣品時│◕↟,可以採用超濾法進行脫鹽濃縮│◕↟,不但耗時短│◕↟,濃縮的效率高│◕↟,而且可降低蛋白質的損失率╃◕☁。目前│◕↟,金屬硫蛋白分離純化技術主要有₪│◕·:膜分離技術│╃、高效液相色譜│╃、凝膠過濾色譜│╃、離子交換色譜│╃、毛細管電泳法等╃◕☁。

      使用的方法是凝膠過濾和離子交換技術相結合方法╃◕☁。凝膠過濾法的缺點是不能將MT的亞型分開│◕↟,所以一般採用高效液相色譜法(HPLC)對MT進行微量分離╃◕☁。高效液相色譜具有分離效果好│╃、精密度與靈敏度佳│╃、重現性好等優點│◕↟,對於複雜成分的分離鑑定更有應用價值╃◕☁。

      ICPMS技術干擾較少│◕↟,精密度高│◕↟,分析速度快│◕↟,檢出限較低│◕↟,動態線性範圍寬│◕↟,並且可提供準確的同位素資訊╃◕☁。高效液相色譜法(HPLC )與質譜儀(ICP-MS )聯用│◕↟,不僅可以將微量MT分離│◕↟,還能將MT亞型較好地分離│◕↟,從而獲得較高純度的金屬硫蛋白╃◕☁。

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