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蛋白酶k在DNA提取中的作用
  • 釋出日期▩•₪:2022-11-15      瀏覽次數▩•₪:199
    • 蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶│₪•·,用於生物樣品中蛋白質的一般降解╃☁·。從林伯氏白色念球菌(tritirachiumalbumlimber)中純化得到╃☁·。蛋白酶k│₪•·,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶╃☁·。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵╃☁·。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性╃☁·。由於蛋白酶k在尿素和SDS中穩定│₪•·,還具有降解天然蛋白質的能力│₪•·,因而它應用很廣泛│₪•·,包括製備脈衝電泳的染色體DNA│₪•·,蛋白質印跡以及去除DNARNA製備中的核酸酶╃☁·。蛋白酶k的一般工作濃度是50—100μg/ml╃☁·。在較廣的pH範圍內(pH4-12.5)均有活性╃☁·。值得注意的是│₪•·,蛋白酶k在原位雜交技術中通常用於雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交訊號.但蛋白酶k的濃度過高·₪▩₪│、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結果.EDTA緩衝液可以替代蛋白酶k的作用,解決上述出現的問題,並能達到理想的染色效果╃☁·。

       

      在生物相關的領域當中│₪•·,經常需要對DNA進行提取分析│₪•·,這樣就可以快速有效地判斷生物種類│₪•·,還可以更深入地對基因組成進行研究│₪•·,而這類研究當中非常關鍵的一步就是從細胞當中提取出DNA╃☁·。要知道DNA處在細胞核當中│₪•·,如果採取簡單粗暴的手段來破壞細胞結構│₪•·,也會同時破壞了更加脆弱的DNA結構│₪•·,導致研究無法繼續進行下去╃☁·。而有了蛋白酶k的幫助│₪•·,就能有效分解細胞當中的所有蛋白質│₪•·,從而把細胞核裡面的DNA釋放出來│₪•·,而且結構不會受影響╃☁·。提取出來的DNA不但能夠保持完整性│₪•·,而且還保持了生命的活性│₪•·,能夠透過簡單的方式進行增殖╃☁·。

       

      那麼如何才能更好的儲存蛋白酶k呢╃·▩?

      只要將蛋白酶k儲存在-20℃冰箱裡│₪•·,避免反覆凍融│₪•·,就能有效保證12月╃☁·。而使用時也要注意│₪•·,孵育溫度為55至65℃│₪•·,理想孵育溫度為58℃│₪•·,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時╃☁·。

       

      以上為大家介紹的就是蛋白酶kDNA提取中的作用│₪•·,有了這種技術│₪•·,也就可以更方便更準確地進行生物基因領域的研究╃☁·。目前這種技術也進入到了實際的生產當中│₪•·,在遺傳育種以及疾病治療當中都發揮了重要的用途╃☁·。

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