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常用抗原的修復方法
  • 釋出日期·│▩│↟:2022-10-31      瀏覽次數·│▩│↟:159
    • 1)抗原熱修復 可根據實驗室的具體條件☁•,選用微波爐抗原修復▩·、高壓鍋抗原修復或水浴高溫抗原修復•↟₪✘◕。抗原熱修復可選用各種緩衝液☁•,如TBS▩·、PBS▩·、重金屬鹽溶液等☁•,但實驗證明☁•,以0.01M枸櫞酸鹽緩衝液(pH6.0)效果•↟₪✘◕。請選用我公司提供的ZLI-9064 枸櫞酸鹽緩衝液(粉劑)配製☁•,取該粉劑一包溶於1000ml的蒸餾水中☁•,混勻☁•,其pH值在6.0 ± 0.1☁•,如因蒸餾水本身造成的pH值偏差☁•,請自行調整•↟₪✘◕。
      (1)高壓熱修復 切片脫蠟至水•↟₪✘◕。將1500ml~3000ml的0.01M枸櫞酸鈉緩衝溶液(pH6.0☁•,工作液)或0.001M EDTA(pH8.0)注入不鏽鋼壓力鍋中加熱至沸騰•↟₪✘◕。切片置於金屬架上☁•,放入鍋內☁•,使切片位於液麵以下☁•,蓋鍋壓閥•↟₪✘◕。當壓力鍋開始慢慢噴氣時(約加熱5~6分鐘後)☁•,計時1~2分鐘☁•,然後將壓力鍋端離熱源☁•,冷水衝至室溫後☁•,取下氣閥☁•,開啟鍋蓋☁•,取出切片☁•,蒸餾水洗後☁•,PBS洗2分鐘×3☁•,下接免疫組化染色步驟•↟₪✘◕。

       
      (2)煮沸熱修復 切片脫蠟至水後☁•,放入盛有0.01M枸櫞酸鈉緩衝溶液(pH6.0☁•,工作液)的容器中☁•,並將此容器置於盛有一定數量自來水的大器皿中☁•,電爐上加熱煮沸☁•,從小容器的溫度到達92℃~98℃起開始計時15~20分鐘☁•,然後端離電爐☁•,室溫冷卻20~30分鐘☁•,蒸餾水沖洗☁•,PBS洗☁•,
       
      (3)微波熱修復•↟₪✘◕。切片脫蠟至水後☁•,3%H2O2處理10分鐘☁•,蒸餾水洗2分鐘×3•↟₪✘◕。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩衝液(工作液)的容器中☁•,置微波爐內加熱使容器內液體溫度保持在92℃~98℃之間並持續10~15分鐘(注意·│▩│↟:無論是使用醫用或家用微波爐☁•,請根據具體機型酌情設定條件☁•,務必滿足以上步驟中對溫度和時間的要求)•↟₪✘◕。取出容器☁•,室溫冷卻10~20分鐘(注意·│▩│↟:不可將切片從緩衝液中取出冷卻☁•,以便使蛋白能夠恢復原有的空間構型)•↟₪✘◕。PBS洗☁•,下接免疫組化染色步驟•↟₪✘◕。適用的抗原有·│▩│↟:AR☁•,Bax☁•,bcl-2☁•,C-fos☁•,X-jun☁•,C-kit☁•,C-myc☁•,E-cadherin☁•,Chromogranin A☁•,Cyclin☁•,ER☁•,Heat shock protein☁•,HPV☁•,Ki-67☁•,MDMZ☁•,p53☁•,p34☁•,p16☁•,p15☁•,P-glycoprotein☁•,PKC☁•,PR☁•,PCNA☁•,ras☁•,Rb☁•,TopoismeraseⅡ等•↟₪✘◕。
       
      2)酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液•↟₪✘◕。胰蛋白酶使用前預熱至37℃☁•,切片也預熱至37℃☁•,消化時間約為5~30分鐘(胰酶的zui終濃度可以根據使用者的要求進行調整☁•,濃度範圍可以從0.05%至0.25%); 胃蛋白酶消化37℃時間為30分鐘•↟₪✘◕。皂素(Saponin)·│▩│↟:一般使用濃度為2~10mg/ml的saponin溶液☁•,消化時間為室溫孵育30分鐘•↟₪✘◕。 適用於被固定遮避的抗原☁•,其中有·│▩│↟:Collagen☁•,Complement☁•,Cytokeratin☁•,C-erB-2☁•,GFAP☁•,LCA☁•,LN等•↟₪✘◕。

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