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Trizol法提取總RNA的流程及原理
  • 釋出日期◕↟☁:2022-10-26      瀏覽次數◕↟☁:377
    • 提取原理◕↟☁:
      Trizol試劑的主要成分是苯/酚☁☁·▩。苯/酚的主要作用是對細胞進行裂解₪╃▩₪·,從而使細胞當中的蛋白質以及核酸物質解聚而得以釋放☁☁·▩。苯/酚雖然可以有效的使蛋白質變性₪╃▩₪·,但它不能抑制RNA酶的活性₪╃▩₪·,因此Trizol中還加入了8-羥基喹/啉₪◕·₪、異硫氰酸胍₪◕·₪、β-巰基乙醇等來抑制內源和外源RNase(即RNA酶)☁☁·▩。

      Trizol試劑是直接從細胞或組織中提取總RNA的試劑☁☁·▩。在樣品的裂解液或勻漿中₪╃▩₪·,Trizol能保持RNA的完整性☁☁·▩。加入氯/仿(CHCl3)後離心₪╃▩₪·,樣品能分成水樣層和有機層☁☁·▩。而RNA存在於水樣層中☁☁·▩。在收集上面的水樣層後₪╃▩₪·,RNA可以透過異丙醇沉澱的方法來還原☁☁·▩。在除去水樣層之後₪╃▩₪·,樣品中的核酸和蛋白也能相繼以沉澱的形式還原☁☁·▩。乙醇沉澱能析出中間層的DNA₪╃▩₪·,在有機層中加入異丙醇能析出有機層的蛋白☁☁·▩。

      Trizol試劑不但可用於小量樣品(組織◕↟☁:50-100mg;細胞◕↟☁:5×106)₪╃▩₪·,也可用於大量樣品(組織≥1g或細胞≥107)₪╃▩₪·,對動物₪◕·₪、植物₪◕·₪、細菌₪◕·₪、血液提取都適用₪╃▩₪·,可同時處理大量不同樣品☁☁·▩。反應迅速₪╃▩₪·,提取的總RNA沒有DNA和蛋白質汙染₪╃▩₪·,可用於Northernblot₪◕·₪、RT-PCR₪◕·₪、RNase保護分析等☁☁·▩。

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