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關於細胞傳代
  • 釋出日期✘₪:2022-09-27      瀏覽次數✘₪:165
    • 1.細胞吸除培育瓶內舊培育液▩✘╃₪│。
       
      2.參加無菌pbs洗液(5-8mL)悄悄潤溼細胞•╃☁▩₪,稀釋多餘的培育基•╃☁▩₪,之後吸走洗液•╃☁▩₪,動作要輕•╃☁▩₪,不可吹打到細胞▩✘╃₪│。
       
      3.向瓶內參加含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少許•╃☁▩₪,以能覆滿瓶底為限▩✘╃₪│。 
       
      4.置溫箱中2~5分鐘•╃☁▩₪,一旦鏡檢發現細胞質回縮•╃☁▩₪,細胞間隙增大後•╃☁▩₪,細胞變圓•╃☁▩₪,比較鬆動後•╃☁▩₪,當即終止消化▩✘╃₪│。

      5.參加該細胞對應的培育基6mLT25培育瓶)或12mLT75培育瓶)終止消化▩✘╃₪│。
       
      6.用吸管透過吸取的培育基悄悄反覆吹打瓶壁細胞•╃☁▩₪,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液▩✘╃₪│。吹打時應儘量以少的次數將細胞從壁上吹下•╃☁▩₪,不只要操控吹打的力度•☁₪₪、次數•╃☁▩₪,還要留意要將細胞儘可能吹成單個▩✘╃₪│。這樣既能削減死細胞•╃☁▩₪,又能便於細胞再次均勻貼壁成長▩✘╃₪│。
       
      7.依據傳代份額•╃☁▩₪,將細胞懸液分瓶•╃☁▩₪,再補充培育基後•╃☁▩₪,靜置於溫箱培育•╃☁▩₪,直止貼壁▩✘╃₪│。
       
      貼壁細胞在培育瓶長成緻密單層後•╃☁▩₪,持續成長的空間缺乏•╃☁▩₪,培育基中的養分成份也耗費較多•╃☁▩₪,同時代謝廢物也有較多堆積•╃☁▩₪,需要分瓶培育•╃☁▩₪,對細胞進行傳代擴增▩✘╃₪│。關於貼壁不太緊的細胞如293•╃☁▩₪,能夠直接吹散後分瓶▩✘╃₪│。而關於貼壁較緊的細胞如CHO•╃☁▩₪,則需要以胰酶消化後再吹散分瓶▩✘╃₪│。
       
      關於懸浮細胞換液時只需要補液就行▩✘╃₪│。
       
      懸浮細胞的傳代則不需要用胰酶消化•╃☁▩₪,直接透過計數算好傳代的份額•╃☁▩₪,直接分瓶•╃☁▩₪,補液▩✘╃₪│。有些懸浮細胞趨於成團成長•╃☁▩₪,此刻細胞成長狀態傑出•╃☁▩₪,當補液時•╃☁▩₪,防止吹打▩✘╃₪│。
       

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