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提取原代細胞的方法與詳細步驟
  • 釋出日期│││:2022-09-21      瀏覽次數│││:362
    • 原代細胞是透過一定的方法如酶法或機械法或生長法使細胞從人體和動物的母體器官☁✘✘·•、組織或液體中分離出來✘·,並在受控環境條件下分離的細胞在體外或其他人體和動物體內生長╃☁✘╃✘。

      原代細胞的提取方法詳細步驟│││:
      1.整個操作要在潔淨通風的超淨臺下進行✘·,所有的器材要高壓消毒╃☁✘╃✘。

      2.根據BALB/c小鼠的體重✘·,將小鼠置於盛有75%乙醇的燒杯內✘·,這一步不僅可以消毒✘·,也可以讓小鼠體毛浸溼✘·,後續剃去皮毛的時候不會沾到剪刀或組織上╃☁✘╃✘。

      3.用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟✘·,裝有PBS的注射器插入心尖✘·,同時在右心耳處剪開一個小口✘·,緩慢推動注射器✘·,隨著心臟的跳動✘·,將體內的血液沖洗出來╃☁✘╃✘。

      4.取出小鼠的肺部組織✘·,將肺組織切成小米粒樣的大小✘·,置於預冷的HBSS中反覆沖洗幾次╃☁✘╃✘。

      5.將小米粒大小的肺組織置於培養瓶中(培養瓶前一天用1%明膠溶液包被培養面✘·,4度過夜✘·,小鼠處理前✘·,將培養瓶放置培養箱中✘·,使其溫度恢復至37度)✘·,置於培養箱37度的環境下✘·,消化4個小時╃☁✘╃✘。

      6.消化4小時後✘·,加入培養基(新增培養基✘·,可以是正常培養時的2倍量)✘·,繼續培養24小時(繼續培養的時間可根據細胞貼壁情況適當調整)╃☁✘╃✘。

      7.24小時後✘·,取出肺組織✘·,鏡下觀察細胞狀態✘·,換液╃☁✘╃✘。

      8.原代細胞的提取和培養是很慢的過程✘·,一般需等到24小時後✘·,才能在鏡下看到些許細胞群✘·,一週到兩週後才會看到鵝卵石樣的排列情況╃☁✘╃✘。

      9.原代細胞2-3天換液一次✘·,因為內皮細胞生長形成單層時✘·,會出現接觸抑制現象╃☁✘╃✘。所以✘·,內皮細胞生長接近單層時就可以傳代了✘·,不要等到長得非常滿╃☁✘╃✘。


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