辣根過氧化酶使試劑中的發光物（luminol）氧化併發光·✘，而試劑中含有增強劑這使得發光增強了1000倍✘✘✘·。在免疫印跡中·✘，將複雜的蛋白混合物經sds-page分離·✘，並轉移到固相膜上（如nc₪╃、pvdf）等·✘，用於免疫學檢測·✘，經HRP標記的抗體與膜上的蛋白直接（標記一抗）或間接（標記二抗）反應✘✘✘·。

 原理

 辣根過氧化酶使試劑中的發光物（luminol）氧化併發光·✘，而試劑中含有增強劑這使得發光增強了1000倍✘✘✘·。在免疫印跡中·✘，將複雜的蛋白混合物經sds-page分離·✘，並轉移到固相膜上（如nc₪╃、pvdf）等·✘，用於免疫學檢測·✘，經HRP標記的抗體與膜上的蛋白直接（標記一抗）或間接（標記二抗）反應✘✘✘·。當加入免疫印跡化學發光試劑後·✘，luminol發生氧化降解·✘，併發射波長為428nm的光·✘，此光可經x光膠片(放射自顯影片)感光記錄下來✘✘✘·。

用途

非放射性發光系統·✘，用於檢測固定在膜上的蛋白·✘，其敏感性達1-5pg✘✘✘·。用x光片可快速地獲得永.久的硬複製結果✘✘✘·。所含獨.特的底物足以維持12小時以上的發光·✘，便於反覆曝光操作·✘，免疫印跡膜經抗體脫卸處理後可供再次抗體探查使用✘✘✘·。適用於痕量蛋白或核酸檢測✘✘✘·。

使用方法

1. 印跡膜製備 按常規方法完成SDS-PAGE和電轉膜操作·✘，適當的封閉非常重要✘✘✘·。可以透過標記一抗或二抗的手段引入HRP·✘，一般採用市售的HRP二抗交聯物✘✘✘·。仔細地淋洗對於降低背景非常重要·✘，在與HRP交聯物溫育後·✘，膜片更需仔細洗滌·✘，所有步驟均在室溫下完成✘✘✘·。