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塗布平板法的實驗原理與方法
  • 釋出日期•◕◕·:2022-07-13      瀏覽次數•◕◕·:127
    • 微生物學實驗中的一種操作方法↟│。由於將含菌材料現加到還較燙的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡▩╃·↟•,而且採用稀釋倒平板法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長▩╃·↟•,因此在微生物學研究中更常用的純種分離方法是稀釋塗布平板法↟│。

      實驗原理

      在稀釋度足夠高的菌液裡▩╃·↟•,聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞▩╃·↟•,從而能在培養基表面形成單個的菌落↟│。

      實驗器材

      1.活材料:蘇雲金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)菌劑↟│。

      2.培養基:牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基

      3.器材:90ml無菌水╃│·•、9ml無菌水╃│·•、無菌平皿╃│·•、lml無菌移液管╃│·•、天平╃│·•、稱樣瓶╃│·•、記號筆╃│·•、玻璃刮鏟等↟│。

      (提示:10-1為10的負一次方▩╃·↟•,即0.1;10-2為10的負二次方▩╃·↟•,即0.01)

      第一步•◕◕·:系列稀釋

      樣品稀釋液的製備 準確稱取待測樣品10g▩╃·↟•,放入裝有90ml無菌水並放有小玻璃珠的250ml三角瓶中▩╃·↟•,用手或置搖床上振盪20min▩╃·↟•,使微生物細胞分散▩╃·↟•,靜置20-30s▩╃·↟•,即成10-1稀釋液;再用1ml無菌吸管▩╃·↟•,吸取10-1稀釋液lml▩╃·↟•,移入裝有9ml無菌水的試管中▩╃·↟•,吹吸3次▩╃·↟•,讓菌液混合均勻▩╃·↟•,即成10-2稀釋液;再換一支無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml▩╃·↟•,移入裝有9ml無菌水的試管中▩╃·↟•,也吹吸三次▩╃·↟•,即成l0-3稀釋液;以此類推▩╃·↟•,連續稀釋▩╃·↟•,製成10-4╃│·•、10-5╃│·•、10-6╃│·•、10-7╃│·•、10-8╃│·•、10-9等一系列稀釋菌液↟│。

      用稀釋平板計數時▩╃·↟•,待測菌稀釋度的選擇應根據樣品確定↟│。樣品中所含待測菌的數量多時▩╃·↟•,稀釋度應高▩╃·↟•,反之則低↟│。通常測定細菌菌劑含菌數時▩╃·↟•,採用10-7╃│·•、10-8╃│·•、10-9稀釋度▩╃·↟•,測定土壤細菌數量時▩╃·↟•,採用10-4╃│·•、10-5╃│·•、10-6稀釋度▩╃·↟•,測定放線菌數量時▩╃·↟•,採用l0-3╃│·•、10-4╃│·•、10-5稀釋度▩╃·↟•,測定真菌數量時▩╃·↟•,採用10-2╃│·•、10-3╃│·•、10-4稀釋度↟│。

      第二步•◕◕·:塗步平板

      平板接種培養 平板接種培養有混合平板培養法和塗抹平板培養法兩種方法↟│。

      (1)混合平板培養法 將無菌平板編上10-7╃│·•、10-8╃│·•、10-9號碼▩╃·↟•,每一號碼設定三個重複▩╃·↟•,用無菌吸管按無菌操作要求吸取10-9稀釋液各1ml放入編號10-9的3個平板中▩╃·↟•,同法吸取10-8稀釋液各lml放入編號10-8的3個平板中▩╃·↟•,再吸取10-7稀釋液各lml放入編號10-7的3個平板中(由低濃度向高濃度時▩╃·↟•,吸管可不必更換)↟│。然後在9個平板中分別倒入已融化並冷卻至45-50℃的細菌培養液▩╃·↟•,輕輕轉動平板▩╃·↟•,使菌液與培養液混合均勻▩╃·↟•,冷凝後倒置▩╃·↟•,適溫培養↟│。至長出菌落後即可計數↟│。

      (2)塗抹平板計數法 塗抹平板計數法與混合法基本相同▩╃·↟•,所不同的是先將培養基熔化後趁熱倒入無菌平板中▩╃·↟•,待凝固後編號▩╃·↟•,然後用無菌吸管吸取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上(每個編號設三個重複)↟│。再用無菌刮鏟將菌液在平板上塗抹均勻▩╃·↟•,每個稀釋度用一個滅菌刮鏟▩╃·↟•,更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌↟│。在由低濃度向高濃度塗抹時▩╃·↟•,也可以不更換刮鏟↟│。將塗抹好的平板平放於桌上20-30min▩╃·↟•,使菌液滲透入培養基內▩╃·↟•,然後將平板倒轉▩╃·↟•,保溫培養▩╃·↟•,至長出菌落後即可計數↟│。



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