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酶聯免疫吸附劑的測定原理
  • 釋出日期↟╃✘│:2022-06-27      瀏覽次數↟╃✘│:99
    • 酶聯免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay╃•╃◕,簡寫ELISA或ELASA)指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯固相載體上╃•╃◕,利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法☁◕◕▩。酶聯免疫吸附測定(ELISA)為免疫學中的經典實驗╃•╃◕,本詞條從定義◕╃•、基本原理◕╃•、分類方法◕╃•、操作要點等方面對其進行了詳細介紹☁◕◕▩。

      原理

      1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay╃•╃◕,ELISA)用於IgG定量測定的文章╃•╃◕,使得1966年開始用於抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法☁◕◕▩。這一方法的基本原理是↟╃✘│:①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面╃•╃◕,並保持其免疫活性☁◕◕▩。②使抗原或抗體與某種酶連線成酶標抗原或抗體╃•╃◕,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性╃•╃◕,又保留酶的活性☁◕◕▩。在測定時╃•╃◕,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應☁◕◕▩。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與其他物質分開╃•╃◕,最後結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例☁◕◕▩。加入酶反應的底物後╃•╃◕,底物被酶催化變為有色產物╃•╃◕,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關╃•╃◕,故可根據顏色反應的深淺有無定性或定量分析☁◕◕▩。由於酶的催化效率很高╃•╃◕,故可極大地放大反應效果╃•╃◕,從而使測定方法達到很高的敏感度☁◕◕▩。

      進展

      親和素是一種糖蛋白╃•╃◕,一分子親和素可以與四個生物素小分子發生專一親和作用╃•╃◕,類似抗原與抗體親和☁◕◕▩。它們之間的作用力是已知*強的非共價作用☁◕◕▩。80年代後╃•╃◕,隨著生物素-親合素系統(BAS)作用被發現╃•╃◕,這一親和作用被結合應用到ELISA技術上╃•╃◕,大大提高了後者反應的靈敏性與專一性☁◕◕▩。生物素很易與蛋白質(如抗體等)以共價鍵結合☁◕◕▩。這樣╃•╃◕,結合了酶的親和素分子與結合有特異性抗體的生物素分子產生反應╃•╃◕,既起到了多級放大作用╃•╃◕,又由於酶在遇到相應底物時的催化作用而呈色╃•╃◕,達到檢測未知抗原(或抗體)分子的目的

       

       

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