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胰蛋白酶的作用
  • 釋出日期╃••╃╃:2022-06-24      瀏覽次數╃••╃╃:102
    • 蛋白酶是水解蛋白質肽鏈的一類酶的總稱✘·。按其降解多肽的方式分成內肽酶和端肽酶兩類✘·。前者可把大分子量的多肽鏈從中間切斷·•₪✘•,形成分子量較小的朊和腖;後者又可分為羧肽酶和氨肽酶·•₪✘•,它們分別從多肽的遊離羧基末端或遊離氨基末端逐一將肽鏈水解生成氨基酸✘·。

      胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散✘·。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣✘·。胰酶分散細胞的活性還與其濃度☁↟₪₪、溫度和作用時間有關·•₪✘•,在 pH 為 8.0 ☁↟₪₪、溫度為 37℃ 時·•₪✘•,胰酶溶液的作用能力強✘·。使用胰酶時·•₪✘•,應把握好濃度☁↟₪₪、溫度和時間·•₪✘•,以免消化過度造成細胞損傷✘·。因 Ca2+ ☁↟₪₪、 Mg2+ 和血清☁↟₪₪、蛋白質可降低胰酶的活性·•₪✘•,所以配製胰酶溶液時應選用不含 Ca2+ ☁↟₪₪、 Mg2+ 的 BSS ·•₪✘•,如╃••╃╃: D-Hanks 液✘·。終止消化時·•₪✘•,可用含有血清培養液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用✘·。
      1. 稱取胰蛋白酶╃••╃╃:按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %·•₪✘•,用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調 PH 到 7.2 左右)或 PBS ( D-hanks )液中✘·。攪拌混勻·•₪✘•,置於 4℃ 內過夜✘·。
      2. 用注射濾器抽濾消毒╃••╃╃:配好的胰酶溶液要在超淨臺內用注射濾器( 0.22 微米微孔濾膜)抽濾除菌✘·。然後分裝成小瓶於 -20℃ 儲存以備使用✘·。
      胰蛋白酶能夠催化蛋白質的特定肽鍵水解·•₪✘•,這個催化過程是不需要能量的·•₪✘•,不會使酶失去活力·•₪✘•,也不會改變形狀和使自身水解✘·。底物與酶的活性中心的結合是可逆的·•₪✘•,這種結合使得蛋白質特定肽鍵因彎曲變形而被活化·•₪✘•,更易於受到水分子的攻擊·•₪✘•,分別形成氨基和羧基而斷裂·•₪✘•,得到小分子多肽或氨基酸✘·。不同的蛋白酶可以作用在不同氨基酸相連組成的肽鍵·•₪✘•,因此胰蛋白酶並不能作用在所有的肽鍵✘·。

       

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