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核酸電泳的分類有哪些╃✘╃?
  • 釋出日期✘·╃╃:2022-06-14      瀏覽次數✘·╃╃:164
    • 帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳₪◕₪◕。核酸電泳是進行核酸研究的重要手段│·▩,是核酸探針▩•··↟、核酸擴增和序列分析等技術所*的組成部分₪◕₪◕。核酸電泳通常在瓊脂糖凝膠或聚b烯醯胺凝膠中進行│·▩,濃度不同的瓊脂糖和聚b烯醯胺可形成分子篩網孔大小不同的凝膠│·▩,可用於分離不同分子量的核酸片段₪◕₪◕。

      一▩•··↟、瓊脂糖凝膠電泳
      1.原理✘·╃╃:
      瓊脂糖是從海藻中提取出來的一種線狀高聚物₪◕₪◕。將瓊脂糖在所需緩衝液中加熱熔化成清澈▩•··↟、透明的溶膠│·▩,然後倒入膠模中│·▩,凝固後將形成一種固體基質│·▩,其密度取決於瓊脂糖的濃度₪◕₪◕。 將凝膠置電場中│·▩,在中性pH值下帶電荷的核酸透過凝膠網孔向陽極遷移│·▩,遷移速率受到核酸的分子大小▩•··↟、構象▩•··↟、瓊脂糖濃度▩•··↟、所加電壓▩•··↟、電場▩•··↟、電泳緩衝液▩•··↟、嵌入染料的量等因素影響₪◕₪◕。在不同條件下電泳適當時間後│·▩,大小▩•··↟、構象不同的核酸片段將處在凝膠不同位置上│·▩,從而達到分離的目的₪◕₪◕。瓊脂糖凝膠的分離範圍較廣│·▩,用各種濃度的瓊脂糖凝膠可分離長度為200bp至50kb的DNA₪◕₪◕。

      二▩•··↟、聚b烯醯胺凝膠電泳
      1.原理✘·╃╃:
      聚b烯醯胺凝膠透過b烯醯胺單體▩•··↟、鏈聚合催化劑N│·▩,N│·▩,N’│·▩,N’-四甲基乙二an(TEMED)和過硫酸an以及交聯劑N│·▩,N’-亞甲雙b烯醯胺之間的化學反應而形成₪◕₪◕。b烯醯胺單體在催化劑作用下產生聚合反應形成長鏈│·▩,長鏈經交聯劑作用交叉連線形成凝膠│·▩,其孔徑由鏈長和交聯度決定₪◕₪◕。鏈長取決於b烯醯胺的濃度│·▩,調節b烯醯胺和交聯劑的濃度比例│·▩,可改變聚合物的交聯度₪◕₪◕。 聚b烯醯胺凝膠電泳可根據電泳樣品的電荷▩•··↟、分子大小及形狀的差別達到分離目的│·▩,兼具分子篩和靜電效應│·▩,分辨力高於瓊脂糖凝膠電泳₪◕₪◕。可分離只相差1個核苷酸的DNA片段₪◕₪◕。 聚b烯醯胺凝膠電泳用於分析和製備長度小於1kb的DNA片段₪◕₪◕。根據所要分離的核酸片段大小│·▩,可製備不同濃度的凝膠₪◕₪◕。

      三▩•··↟、應用範圍✘·╃╃:
      瓊脂糖凝膠電泳適合分離▩•··↟、純化200bp-50kB長度的核酸片段│·▩,廣泛應用於基因組提取與分析▩•··↟、載體構建▩•··↟、質粒提取等方面│·▩,解析度較低│·▩,相差100bp以內的核酸片段較難分離₪◕₪◕。
      聚b烯醯胺凝膠電泳適合分離1kB以下的小核酸片段│·▩,適用於序列分析與比對▩•··↟、核酶分析與鑑定▩•··↟、小片段核酸的提取與分析等方面解析度較高│·▩,可以精確分離相差十幾至幾十bp的小片段核酸分子₪◕₪◕。

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