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電泳緩衝液的特點是什麼╃✘•╃?有何作用╃✘•╃?
  • 釋出日期·✘:2022-06-07      瀏覽次數·✘:140
    • 電泳緩衝液是核酸↟☁、蛋白質凝膠電泳系統的一個重要組成✘▩•, 是電泳場中的導體✘▩•,也是維持電泳系統恆定 pH值的必要條件₪▩。常見的核酸電泳緩衝液有:TAE↟☁、TBE↟☁、TPE和MOPS等₪▩。


      電泳緩衝液的特點·✘:
      1.TAE是使用廣泛的緩衝系統₪▩。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質量(TBE中電泳時測出的相對分子質量會大於實際分子質量)✘▩•,且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩衝液快約10%✘▩•,電泳大於13kb的片段時用TAE緩衝液將取得更好的分離效果✘▩•,此外✘▩•,回收DNA片段時也易用TAE緩衝系統進行電泳₪▩。TAE的缺點是緩衝容量小✘▩•,長時間電泳(如過夜)不可選用✘▩•,除非有迴圈裝置使兩極的緩衝液得到交換₪▩。


      2.TBE的特點是緩衝能力強✘▩•,長時間電泳時可選用TBE✘▩•,並且當用於電泳小於1kb的片段時分離效果更好₪▩。TBE用於瓊脂糖凝膠時易造成高電滲作用✘▩•,並且因與瓊脂糖相互作用生成非共價結合的四羥基硼/酸鹽複合物而使DNA片段的回收率降低✘▩•,所以不宜在回收電泳中使用₪▩。


      3.TPE的緩衝能力也較強✘▩•,但由於磷酸鹽易在乙醇沉澱過程中析出✘▩•,所以也不宜在回收DNA片段的電泳中使用₪▩。


      電泳緩衝液的作用·✘:
      1.緩衝液在電泳過程中的一個作用是維持合適的pH₪▩。電泳時陽極與陰極都會發生電解反應✘▩•,陽極發生的是氧化反應(4OH--4e->2H2O+O2)✘▩•,陰極發生的是還原反應(4H++4e->2H2)✘▩•,長時間的電泳將使陽極變酸✘▩•,陰極變鹼₪▩。一個好的緩衝系統應有較強的緩衝能力✘▩•,使溶液兩極的pH保持基本不變₪▩。


      2.電泳緩衝液的另一個作用是使溶液具有一定的導電性✘▩•,以利於DNA分子的遷移✘▩•,例如✘▩•,一般電泳緩衝液中應含有0.01-0.04mol/L的Na+離子✘▩•,Na+離子的濃度太低時電泳速度變慢;太高時就會造成過大的電流使膠發熱甚至熔化₪▩。


      3.電泳緩衝液還有一個組分是EDTA✘▩•,加入濃度為1-2mmol/L✘▩•,目的是螯合Mg2+ 等離子✘▩•,防止電泳時啟用 DNA酶✘▩•,此外還可防止Mg2+離子與核酸生成沉澱₪▩。

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