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胰蛋白酶的作用有哪些
  • 釋出日期│✘:2022-06-06      瀏覽次數│✘:129
    • 胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 為蛋白酶的一種◕☁,EC 3.4.4.4◕☁,是從牛·₪、羊·₪、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶₪│。在脊椎動物中◕☁,作為消化酶而起作用₪│。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成後◕☁,作為胰液的成分而分泌◕☁,受腸激酶◕☁,或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶◕☁,是肽鏈內切酶◕☁,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側切斷₪│。它不僅起消化酶的作用◕☁,而且還能限制分解糜蛋白酶原·₪、羧肽酶原·₪、磷脂酶原等其它酶的前體◕☁,起活化作用₪│。是特異性*的蛋白酶◕☁,在決定蛋白質的氨基酸排列中◕☁,它成為*的工具₪│。

      胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散₪│。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣₪│。胰酶分散細胞的活性還與其濃度·₪、溫度和作用時間有關◕☁,在 pH 為 8.0 ·₪、溫度為 37℃ 時◕☁,胰酶溶液的作用能力*₪│。使用胰酶時◕☁,應把握好濃度·₪、溫度和時間◕☁,以免消化過度造成細胞損傷₪│。因 Ca2+ ·₪、 Mg2+ 和血清·₪、蛋白質可降低胰酶的活性◕☁,所以配製胰酶溶液時應選用不含 Ca2+ ·₪、 Mg2+ 的 BSS ◕☁,如│✘: D-Hanks 液₪│。終止消化時◕☁,可用含有血清培養液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用₪│。
      1. 稱取胰蛋白酶│✘:按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %◕☁,用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調 PH 到 7.2 左右)或 PBS ( D-hanks )液中₪│。攪拌混勻◕☁,置於 4℃ 內過夜₪│。
      2. 用注射濾器抽濾消毒│✘:配好的胰酶溶液要在超淨臺內用注射濾器( 0.22 微米微孔濾膜)抽濾除菌₪│。
      3. 分裝成小瓶於 -20℃ 儲存以備使用可₪│。

      胰蛋白酶-EDTA消化液(Trypsin-EDTA Solution)含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA(0.53mM)◕☁,溶於無鈣鎂平衡鹽溶液中◕☁,經過濾除菌◕☁,可以直接用於培養細胞和組織的消化₪│。本產品具有方便快速·₪、穩定安全·₪、細胞狀態好等特點₪│。

      產品說明│✘:

      在組織細胞的體外培養和原代細胞培養中的組織細胞分散(將組織塊製備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養中◕☁,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液₪│。常用的消化液為胰蛋白酶◕☁,EDTA等◕☁,其功能主要是使細胞間的蛋白質(如細胞外基質)水解◕☁,使組織或貼壁細胞分散成單個細胞◕☁,製成細胞懸液用於進一步的實驗₪│。


      使用方法│✘:

      1. 貼壁細胞的消化│✘:

      a) 吸去培養液◕☁,用無菌的PBS·₪、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次◕☁,以去除殘餘的血清₪│。

      b) 加入少量胰蛋白酶消化液◕☁,蓋過細胞即可◕☁,室溫放置1-2分鐘₪│。不同的細胞消化時間有所不同◕☁,對於貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間₪│。

      c) 顯微鏡下觀察◕☁,細胞明顯收縮◕☁,並且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來₪│。此時吸除消化液₪│。加入含血清的細胞培養液◕☁,吹打下細胞◕☁,即可直接用於後續實驗₪│。

      d) 如果發現消化不足◕☁,可加入胰蛋白酶消化液重新消化₪│。

      e) 如果發現細胞消化時間過長◕☁,未及吹打細胞◕☁,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落◕☁,直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來₪│。1000-2000g離心1分鐘◕☁,沉澱細胞◕☁,儘量去除胰酶細胞消化液後◕☁,加入含血清的完全培養液重新懸浮細胞◕☁,即可用於後續實驗₪│。

      2. 組織的消化│✘:

      不同的組織需要消化的時間相差很大◕☁,通常以消化後可以充分打散組織為宜₪│。


      注意事項│✘:

      1.由於組織或細胞性質不同◕☁,實驗人員應依據具體情況◕☁,確定最佳消化時間;消化細胞時間不宜過長◕☁,否則會影響細胞貼壁和生長狀況;

      2.本產品不含抑菌劑◕☁,在使用過程中要特別注意無菌操作◕☁,避免消化液被微生物汙染;

      3.不宜4℃長期儲存◕☁,切忌反覆凍融◕☁,小量使用時建議分裝凍存;

      4.  為了您的安全和健康◕☁,請穿實驗服並戴一次性手套操作₪│。


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