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Trizol提取RNA的詳細步驟
  • 釋出日期╃↟:2022-06-01      瀏覽次數╃↟:165
    • 1·✘▩、在提取組織RNA時✘•·,每50~100mg組織用1ml Trizol試劑對組織進行裂解;提取細胞RNA時✘•·,先離心沉澱細胞✘•·,每5-10╳106個細胞加1ml Trizol後✘•·,反覆用槍吹打或劇烈振盪以裂解細胞·│₪☁•。

      2·✘▩、將組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中,在室溫15~30C下放置5分鐘;在EP管中✘•·,按照每1mlTRIZOL加0.2ml氯/仿的量加入氯/仿✘•·,蓋上EP管蓋子✘•·,在手中用力震盪15秒✘•·,在室溫下(15℃~30℃)放置2~3分鐘後✘•·,12000g(2℃~8℃)離心15分鐘·│₪☁•。

      3·✘▩、取上層水相置於新EP管中,按照每1mlTRIZOL加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇✘•·,在室溫下(15℃~30℃)放置10分鐘,12000g(2℃~8℃)離心10分鐘·│₪☁•。

      4·✘▩、按照每1mlTRIZOL加1ml 75%乙醇進行洗滌✘•·,渦旋混合✘•·,7500g(2℃~8℃)離心5分鐘✘•·,棄上清;讓沉澱的RNA在室溫下自然乾燥;用Rnase-freewater溶解RNA沉澱·│₪☁•。

      Ps:在收集到生物材料之後✘•·,最好馬上進行RNA製備工作·│₪☁•。若需暫時儲存✘•·,則應以液氮將生物材料急速冷凍後✘•·,儲存於-80℃冷凍櫃·│₪☁•。在製備RNA時✘•·,將儲存於冷凍櫃的材料取出✘•·,立即以加入液氮研磨的方式打破細胞✘•·,不可以先行解凍✘•·,以避免RNase的作用·│₪☁•。

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