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細說Gibco澳洲優級胎牛血清的使用和儲存方法
  • 釋出日期╃╃☁:2021-12-21      瀏覽次數╃╃☁:218
    •   在細胞培養過程中◕│☁,經常加入5%-20%的胎牛血清◕│☁,最常使用的Gibco澳洲優級胎牛血清濃度是10%☁✘•·↟。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜◕│☁,影響後續實驗的結果◕│☁,我們在實驗中使用10%的胎牛血清培養293T細胞◕│☁,效果非常好☁✘•·↟。但是有些細胞也會使用5%的Hyclone FBS或者20%的Gibco澳洲優級胎牛血清◕│☁,要根據具體細胞選擇合適的胎牛血清濃度☁✘•·↟。
       
        Gibco澳洲優級胎牛血清儲存方法╃╃☁:
        1··✘₪▩、需要長期儲存的血清必須儲存於-20℃-70℃ 低溫冰箱中☁✘•·↟。4℃冰箱中儲存時間切勿超過1個月☁✘•·↟。切勿將血清在37℃放置太久◕│☁,否則血清會變得渾濁◕│☁,同時血清中的有效成分會被破壞◕│☁,而影響血清質量☁✘•·↟。如果一次無法用完一瓶◕│☁,可將40~45ml分裝於無菌50ml離心管中☁✘•·↟。由於血清結冰時體積會增加約10%◕│☁,因此◕│☁,血清在凍入低溫冰箱前◕│☁,必須預留一定體積空間◕│☁,否則易發生汙染或玻璃瓶凍裂☁✘•·↟。
        2··✘₪▩、一般廠商提供的血清為無菌◕│☁,無需再過濾除菌☁✘•·↟。如發現牛血清有懸浮物◕│☁,則可將牛血清加入培養液內一起過濾◕│☁,切勿直接過濾牛血清☁✘•·↟。
        3··✘₪▩、瓶裝Gibco澳洲優級胎牛血清解凍需採用逐步解凍法╃╃☁:-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天☁✘•·↟。然後移入室溫◕│☁,待全部溶解後再分裝◕│☁,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml☁✘•·↟。在溶解過程中須規則搖晃均勻◕│☁,使溫度與成分均一◕│☁,減少沈澱的發生☁✘•·↟。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍◕│☁,這樣因溫度改變太大◕│☁,容易造成蛋白質凝集而出現沉澱☁✘•·↟。
        4··✘₪▩、熱滅活是指56℃◕│☁,30分鐘加熱已*解凍的血清☁✘•·↟。加熱過程中須規則搖晃均勻☁✘•·↟。此熱處理的目的是使血清中的補體成分滅活☁✘•·↟。除非必須◕│☁,一般不建議作此熱處理◕│☁,因為熱處理會造成血清沉澱物顯著增多◕│☁,而且還會影響血清的質量☁✘•·↟。補體參與反應有╃╃☁:細胞毒作用◕│☁,平滑肌細胞收縮◕│☁,肥大細胞和血小板釋放組胺◕│☁,增強吞噬作用◕│☁,促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化☁✘•·↟。
        5··✘₪▩、血清中的沉澱物絮狀物╃╃☁:主要是牛血清中的脂蛋白變性及解凍後牛血清中纖維蛋白造成◕│☁,這些絮狀物不會影響血清本身的質量☁✘•·↟。可用離心3000rpm◕│☁,5分鐘去除◕│☁,也可不用處理☁✘•·↟。顯微鏡下"小黑點"╃╃☁:經過熱處理過的血清◕│☁,沉澱物的形成會顯著增多☁✘•·↟。有些沉澱物在顯微鏡下觀察象"小黑點"◕│☁,常誤認為血清受汙染☁✘•·↟。一般情況下◕│☁,此小黑點不會影響細胞生長◕│☁,但如果懷疑血清質量◕│☁,則應立即停止使用◕│☁,更換另一批號的血清☁✘•·↟。
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