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抗體和重組蛋白的使用及儲存方法☁☁,有哪些✘│╃₪?
  • 釋出日期·◕₪•:2021-03-16      瀏覽次數·◕₪•:473
    • 無論是儲存還是運輸☁☁,請避免反覆凍融╃•。反覆凍融☁☁,冰晶會破壞抗體和重組蛋白的空間結構☁☁,導致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構象改變☁☁,從而降低抗體的結合能力☁☁,也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度╃•。抗體和重組蛋白儲存得當與否☁☁,直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果☁☁,如果儲存得當☁☁,抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持數年╃•。

      1. 收到抗體和重組蛋白後的操作
      收到抗體和重組蛋白後(大部分抗體和重組蛋白是溶液態)☁☁,請務必在 4℃☁☁,12000rpm☁☁,離心 3 分鐘☁☁,再開啟管蓋進行分裝☁↟╃₪◕、溶解和儲存(如果抗體和重組蛋白體積小於 50?l☁☁,請延長離心時間至 5 分鐘☁☁,以保證全部抗體和重組蛋白均離心下來☁☁,乾粉狀態的同樣適用)╃•。抗體和重組蛋白使用特製的儲存管☁☁,只有在 12000rpm 離心 3 分鐘☁☁,才能將附著在管壁或蓋內的抗體和重組蛋白全部離心下來(即使是在 10000rpm 離心也會離心不*☁☁,導致出現抗體和重組蛋白的量不足的現象)╃•。請詳細閱讀說明書☁☁,並按照推薦的儲存條件正確儲存和使用抗體和重組蛋白╃•。

      2. 抗體和重組蛋白的長期儲存
      對於 大部分抗體和重組蛋白☁☁,比較合適的儲存方式是·◕₪•:抗體分裝後儲存在 -20℃☁☁,重組蛋白分裝後儲存在 -80℃╃•。
      (1)分裝可以-大程度的降低反覆凍融對抗體和重組蛋白活性的損害☁☁,同時也降低了由於多次從同一管中吸取抗體和重組蛋白造成的汙染可能性╃•。
      (2)分裝的量以一次實驗用完為好☁☁,少不能少於 10 ?l 每份╃•。因為分裝體積越小☁☁,抗體和重組蛋白的濃度越可能會受到蒸發以及管壁吸附的影響╃•。
      (3)復融後的分裝抗體和重組蛋白如果一次用不完☁☁,將剩餘母液儲存在 4℃☁☁,避免再凍起來╃•。
      (4)抗體和重組蛋白工作液應該當天配製當天用完☁☁,4℃ 儲存儘量不要超過 1 天╃•。
      (5)絕-對避免將抗體和重組蛋白儲存在自動除霜冰箱中☁☁,將抗體和重組蛋白儲存在冰箱裡層☁☁,避免溫度變化造成反覆凍融╃•。


      3. 抗體和重組蛋白的短期儲存
      大部分 的抗體和重組蛋白收到後 4℃ 短暫儲存 1~2 周☁☁,對抗體和重組蛋白活性沒有影響╃•。如果抗體和重組蛋白很快會使用(1~2 周內)☁☁,推薦在 4℃ 儲存☁☁,這是為了避免反覆凍融對抗體和重組蛋白活性的損害╃•。關鍵的一點是要根據說明書推薦的方式來正確的儲存抗體和重組蛋白╃•。

      4. 抗體和重組蛋白的運輸條件
      一般的運輸過程需要 1~2 周的時間☁☁,所以是在低溫 4℃ 的條件下來完成的╃•。4℃ 運輸主要的目的是為了避免反覆凍融對抗體和重組蛋白活性的損害(如果使用乾冰運輸☁☁,那麼收到時抗體和重組蛋白是凍起來的☁☁,為了分裝就需要解凍☁☁,這就多了一次凍融的過程)☁☁,所以運輸過程中一般避免乾冰運輸╃•。


      5. 抗體和重組蛋白的穩定性
      (1)抗體的穩定性是自然界長期進化的結果☁☁,抗體是免疫系統中重要的分子之一☁☁,其穩定性是自然進化篩選的結果☁☁,在眾多物種中☁☁,抗體分子形成了保守而穩定的結構╃•。
      (2)抗體的高Tm值☁☁,在室溫下☁☁,甚至短時間溫度達到 50~60℃☁☁,抗體分子都能維持正確摺疊☁☁,保持其應有的活性╃•。
      (3)抗體和重組蛋白的純度╃•。 採用先進的抗體和重組蛋白純化技術☁☁,確保抗體和重組蛋白產品的高純度☁☁,保障其抗體和重組蛋白產品的穩定性╃•。
      (4)抗體和重組蛋白的濃度╃•。高濃度的抗體和重組蛋白產品可減少容器表面吸附造成的物質損失☁☁,高濃度的抗體和重組蛋白穩定性更好╃•。 大部分抗體和重組蛋白濃度為 1mg/ml☁☁,抗體和重組蛋白純度高☁☁,特異性好☁☁,效價更高╃•。


      6. 重組蛋白的特性
      重組蛋白分為凍乾粉和溶液態兩種儲存形式☁☁,原核細胞表達的重組蛋白為凍乾粉狀態☁☁,真核細胞表達的重組蛋白為溶液態儲存☁☁,這樣使得重組蛋白非常穩定☁☁,在 -80℃ 條件下可儲存數年╃•。凍乾粉在使用前需進行溶解☁☁,其中溶解的方法非常關鍵☁☁,因為溶解不好會降低蛋白的效用╃•。溶液態儲存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意☁☁,這些都是使用者在實際應用中經常遇到的問題╃•。
      (1)原核細胞表達的重組蛋白╃•。 大腸桿菌表達的凍乾重組蛋白☁☁,已經從包涵體中提純☁☁,添加了蛋白保護劑☁☁,使用過濾後的無菌水作為復溶劑即可☁☁,復溶凍幹蛋白 100?g☁☁,用 86?l 的超純水☁☁,輕輕搖晃使蛋白溶解☁☁,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可*溶解☁☁,一定不能使用渦旋儀進行快速振盪或劇烈搖晃╃•。
      (2)真核細胞表達的重組蛋白╃•。有活性的蛋白質不僅要轉錄和翻譯☁☁,還要進行翻譯後的加工☁☁,使得蛋白質的空間摺疊方式維持正常☁☁,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行☁☁,如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內含子☁☁,對翻譯後的蛋白質進行加工☁☁,這樣表達的蛋白質具有生物活性╃•。我們用溶液態來儲存☁☁,保持了其良好的活性和穩定性╃•。
      (3)重組蛋白的保護劑╃•。在凍乾和儲存過程中常用的保護劑或穩定劑有糖類☁☁,多元醇☁☁,聚合物☁☁,表面活性劑☁☁,某些蛋白和氨基酸等╃•。我們通常加 8%(質量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍幹保護劑╃•。海藻糖可明顯阻止蛋白質二級結構改變以及凍幹過程中蛋白質的伸展和聚集☁☁,甘露醇也是一種普遍應用的凍幹保護劑和填充劑╃•。

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